Atividade citotóxica de complexos de rutênio à base de benzonitrila e bipiridina em tumor de Ehrlich

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dc.contributor.advisor-co1Andrade, Francyelli Mariana dos Santos Mello
dc.contributor.advisor-co1Latteshttp://lattes.cnpq.br/9442770706888077eng
dc.contributor.advisor1Lacerda, Elisângela de Paula Silveira
dc.contributor.advisor1Latteshttp://lattes.cnpq.br/9390789693192751eng
dc.contributor.referee1Lacerda, Elisângela de Paula Silveira
dc.contributor.referee2Pereira, Flávia de Castro
dc.contributor.referee3Oliveira Junior, Robson José de
dc.creatorMagalhães, Lorena Félix
dc.creator.Latteshttp://lattes.cnpq.br/9903578409503022eng
dc.date.accessioned2019-02-27T11:53:02Z
dc.date.issued2016-04-01
dc.description.abstractNew antitumor agents based on metals have been developed in order to reduce toxicity, to improve the pharmacological profile and therapeutic efficacy. Among the anticancer agents, the most promising are the ruthenium complexes for demonstrating antimetastatic properties, low toxicity to normal cells and high selectivity for tumor cells. This study aimed to determine the potential cytotoxic, genotoxic and elucidate the pathway of cell death signaling of ruthenium (II) complexes / bipyridine, in vitro, in cell line murine breast carcinoma, Ehrlich tumor. To assess the cytotoxicity of the complexes was performed MTT assay. IC50 values were: 14,93μM and 8,52μM for complexo1 and 2, respectively. In normal cells, the IC50 of complexes 1 was 0,18μM and 2:34 ± 53.73 ± 5,71μM for 2 complex. The complex 2 had a better cytotoxic activity and relative potential of 6.31, being selected for further study. For evaluating the genotoxicity of complex 2 was performed comet assay. After 24h, the compound 2 at concentrations of 4, 8 and 16μM induced DNA damage of 44, 53 and 44%, respectively. After 48 hours, induced damage of 48, 45 and 42.5% compared to the negative control 16.5%. To evaluate the effect of compound 2 on the cell cycle kinetics was performed testing the cell cycle by flow cytometry. After 24 hours of treatment, an increase in the percentage of cells in G0 / G1 phase and reduced of cells in S phase and G2 / M was observed, considering a cycle arrest. To evaluate the type of death induced by 2 complex, the test for detection of apoptosis / necrosis by fluorescent microscopy was conducted. After 24 hours of treatment at concentrations of 4, 8 and 16μM were observed 33%, 42% and 30% respectively of cells in early apoptosis compared to negative control 11%. After 48h at concentrations of 4, 8 and 16μM were observed 50%, 64% and 60% of cells in early apoptosis respectively compared to the negative control. Annexin V-FITC staining assay was performed to analyze the type of death induced by compound 2. Both 24 as for 48h, a decrease in the number of viable cells and consequently an increase in the number of apoptotic cells was observed. However, the number of cells in early apoptosis was more significant for the time of 48h. When assessed the expression of the Tp53 genes Bax et Caspase 9 by qPCR, we observed a significant increase in the rate of expression of the Tp53 genes Bax and treatment for 6h. Analysis of expression of proteins involved in cell cycle process, DNA repair and cell death was assessed by western blot. We observed an increase in the levels of Bax and caspase 7. The new complex of ruthenium (II), tested is promising because it has low IC50, selectivity for tumor cells, and induce DNA damage, cell cycle arrest and cell death by apoptosis through caspase activation.eng
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dc.description.resumoNovos agentes antitumorais baseados em metais têm sido desenvolvidos com o propósito de reduzir os efeitos tóxicos, melhorar o perfil farmacológico e a eficácia terapêutica. Dentre os agentes antineoplásicos, os mais promissores são os complexos de rutênio por demonstrarem propriedades antimetastática, baixa toxicidade para células normais e alta seletividade para células tumorais. O presente estudo objetivou determinar o potencial citotóxico, genotóxico e elucidar a via de sinalização de morte celular dos complexos de rutênio(II)/bipiridínicos, in vitro, em linhagem celular de carcinoma de mama murino, Tumor de Ehrlich. Para avaliar a citotoxicidade dos complexos foi realizado o teste de MTT. Os valores de IC50 foram: de 14,93μM e 8,52μM para o complexo1 e 2, respectivamente. Para as células normais, a IC50 do complexo 1 foi de 2.34 ± 0,18μM e de 53.73 ± 5,71μM para o complexo 2. O complexo 2 obteve melhor atividade citotóxica e potencial seletivo de 6,31, sendo selecionado para a continuidade dos estudos. Para avaliar a genotoxicidade do complexo 2, foi realizado o teste de cometa. Após 24h, o complexo 2, nas concentrações de 4, 8 e 16 μM induziu dano no DNA de 44, 53 e 44%, respectivamente. Após 48h, induziu dano de 48, 45 e 42,5% comparado com o controle negativo de 16,5%. Para avaliar o efeito do complexo 2 sobre a cinética do ciclo celular, foi realizado o teste de ciclo celular por citometria de fluxo. Após 24h de tratamento, foi observado um aumento na porcentagem de células na fase G0/G1 e uma redução das células na fase S e G2/M, considerando uma parada do ciclo. Para avaliar o tipo de morte induzido pelo complexo 2 , foi realizado o teste de detecção de apoptose/necrose por microscopia de fluorescência. Após 24h de tratamento nas concentrações de 4, 8 e 16μM foram observados 33%, 42% e 30%, respectivamente de células em apoptose inicial em relação ao controle negativo 11%. Após 48h nas concentrações 4, 8 e 16μM foram observados 50%, 64% e 60% de células em apoptose inicial respectivamente, comparado com o controle negativo. Foi realizada o ensaio de coloração anexina V-FITC para analisar o tipo de morte induzido pelo complexo 2. Tanto em 24 quanto em 48h, foi observado um decréscimo no número de células viáveis e consequentemente um aumento no número de células em apoptose. No entanto o número de células em apoptose inicial foi mais significativo para o tempo de 48h. Quando avaliado a expressão dos genes Tp53, Bax e Caspase 9 por qPCR, observou-se um aumento significativo na taxa de expressão dos genes Tp53 e Bax durante 6h de tratamento. A análise da expressão das proteínas envolvidas no processo de ciclo celular, reparo de DNA e morte celular foi avaliada por western blot. Observou-se um aumento nos níveis de Bax e Caspase 7. O novo complexo de rutênio (II) testado é promissor, pois apresenta baixa IC50, seletividade para células tumorais, além de induzir dano ao DNA, parada do ciclo celular e morte celular por apoptose mediante ativação de caspases.eng
dc.description.sponsorshipCoordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPESeng
dc.formatapplication/pdf*
dc.identifier.citationMAGALHÃES, L. F. Atividade citotóxica de complexos de rutênio à base de benzonitrila e bipiridina em tumor de Ehrlich. 2016. 110 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Biológicas) - Universidade Federal de Goiás, Goiânia, 2016.eng
dc.identifier.urihttp://repositorio.bc.ufg.br/tede/handle/tede/9309
dc.languageporeng
dc.publisherUniversidade Federal de Goiáseng
dc.publisher.countryBrasileng
dc.publisher.departmentInstituto de Ciências Biológicas - ICB (RG)eng
dc.publisher.initialsUFGeng
dc.publisher.programPrograma de Pós-graduação em Ciências Biológicas (ICB)eng
dc.rightsAcesso Aberto
dc.rights.urihttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
dc.subjectCompostos de rutênio (II)por
dc.subjectTumor de Ehrlichpor
dc.subjectCitotoxicidadepor
dc.subjectDano ao DNApor
dc.subjectApoptosepor
dc.subjectCiclo celularpor
dc.subjectRuthenium compounds (II)eng
dc.subjectEhrlich tumoreng
dc.subjectCytotoxicityeng
dc.subjectDNA damageeng
dc.subjectApoptosiseng
dc.subjectCell cycleeng
dc.subject.cnpqCIENCIAS BIOLOGICAS::GENETICAeng
dc.titleAtividade citotóxica de complexos de rutênio à base de benzonitrila e bipiridina em tumor de Ehrlicheng
dc.title.alternativeCytotoxic activity of benzonitrile and bipyridine-based ruthenium complexes in Ehrlich tumoreng
dc.typeDissertaçãoeng

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