Avaliação da atividade antiproliferativa in vitro e antitumoral in vivo do composto LQFM030 no tumor ascítico de Ehrlich

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dc.contributor.advisor-co1Cortez, Alane Pereira
dc.contributor.advisor-co1Latteshttp://lattes.cnpq.br/2956692199865146eng
dc.contributor.advisor1Valadares, Marize Campos
dc.contributor.advisor1Latteshttp://lattes.cnpq.br/6157755243167018eng
dc.contributor.referee1Valadares, Marize Campos
dc.contributor.referee2Meneghati, Ricardo
dc.contributor.referee3Castro, Carlos Henrique
dc.contributor.referee4Barcelos, Rejane da Silva Sena
dc.contributor.referee5Fonseca, Simone Gonçalves da
dc.creatorMota, Mariana Flávia da
dc.creator.Latteshttp://lattes.cnpq.br/5228520065672879eng
dc.date.accessioned2019-08-02T15:00:32Z
dc.date.issued2013-12-06
dc.description.abstractActivation of the p53 pathway by inhibition of MDM2 has been proposed as a new strategy for developing new anti-tumor agents. Analogs of cis-imidazoline called nutlins showed ability to block the binding of p53 to MDM2, preventing p53 degradation and thus exhibiting in vivo anti-tumor and in vitro antiproliferative activities. In view of the anti-tumor potential of the nutlins and their complex production, we designed and synthesized analogues as LQFM030 by employing the strategy of molecular simplification. The aim of this study was to evaluate the anti-tumor activity in vivo and the antiproliferative activity in vitro of the LQFM030 compound in the experimental model Ehrlich ascites tumor (EAT). For evaluation of anti-tumor activity in vivo we used male Swiss albino mice that were treated for 10 days with 50, 75 or 150 mg / kg of the compound LQFM030. After treatment, the anti-tumor activity of the compound was assessed by the difference of the weight and ascitic fluid volume, number of tumor cells by trypan blue exclusion test, peritoneal angiogenesis and the VEGF production. The anti-tumor mechanisms were assessed by flow cytometry and we also assessed hematological and biochemical parameters of the animals. The in vitro antiproliferative activity was evaluated in EAT cells by using the trypan blue exclusion method, and the mechanisms involved in the death of EAT cells were investigated by optical and fluorescence microscopy, flow cytometry, real-time PCR and western blot. Data were analyzed by analysis of variance (one-way ANOVA) and subsequent Newman-Keuls test to compare means or by t test using the Graph pad prism program. Means were considered statistically significant when p<0.05. The LQFM030 compound was able to inhibit the tumor of EAT bearing animals in a dose-dependent manner with an ED50 of 150 mg/kg. We also observed reduction in peritoneal angiogenesis and in VEGF production, and the treatment did not significantly change the hematological and biochemical parameters of the animals. The in vitro treatment also showed antiproliferative and cytotoxic concentration-dependent activities, increased the expression of p53 protein and activated the p53 pathway (through activation of proteins p21 and p27 and MDM2 reduction). Furthermore, the compound caused a retention of EAT cells in the G1 phase of the cell cycle and led the cells to apoptosis. We observed apoptosis by the morphology of the cells, DNA fragmentation, externalization of phosphatidylserine and by activation of initiator and effector caspases. The transcription of p53 was not affected by LQFM030, indicating that the regulation of p53 was post-transcriptional. Just as nutlins, LQFM030 showed antitumor activity in vivo and antiproliferative activity in vitro, probably by inhibiting the p53-MDM2 interaction and reactivating p53 and its main functions, the retention in the cell cycle and apoptosis. These results suggest that LQFM030 is an interesting candidate in the development of new anti-tumor therapeutic agents.eng
dc.description.provenanceSubmitted by Marlene Santos (marlene.bc.ufg@gmail.com) on 2019-07-17T18:29:06Z No. of bitstreams: 2 Tese - Mariana Flávia da Mota - 2013.pdf: 4782458 bytes, checksum: acb98cdd286359e560f8337e7a7c3fb9 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5)eng
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dc.description.resumoA ativação da via p53 por inibição de MDM2 tem sido proposta como uma nova estratégia para o desenvolvimento de novos agentes antitumorais. Análogos da cis-imidazolina chamados nutlins apresentaram habilidade em bloquear a ligação da proteína p53 à MDM2, de forma a prevenir a degradação da p53 e exibir atividade antitumoral in vivo e antiproliferativa in vitro. Tendo em vista o potencial antitumoral dos nutlins e sua complexa produção, foram planejados e sintetizados análogos como o LQFM030, empregando a estratégia da simplificação molecular. Assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade antitumoral in vivo e antiproliferativa in vitro do composto LQFM030 utilizando o modelo experimental do tumor ascítico de Ehrlich (TAE). Para a avaliação da atividade antitumoral in vivo foram utilizados camundongos swiss albinos machos tratados por 10 dias com 50, 75 ou 150 mg/Kg do composto LQFM030. Após o tratamento, a atividade antitumoral do composto foi avaliada pela diferença de peso e do volume de líquido ascítico, pelo número de células tumorais utilizando o teste de exclusão do azul de tripano, pela angiogênese peritonial e pela produção de VEGF. Os mecanismos antitumorais foram avaliados por citometria de fluxo e avaliou-se ainda os parâmetros hematológicos e bioquímicos dos animais. A atividade antiproliferativa in vitro foi avaliada em células do TAE pelo método da exclusão do azul de tripano e os mecanismos envolvidos na morte das células do TAE foram investigados por microscopia óptica e de fluorescência, citometria de fluxo, PCR em tempo real e western blot. Os dados foram analisados por análise de variância (one-way ANOVA) e teste a posteriori de Newman-Keuls para comparação de médias ou por teste de t com o auxílio do programa Graph pad prism. As médias foram consideradas estatisticamente significativas quando p < 0,05. O composto LQFM030 foi capaz de inibir o tumor dos animais portadores do TAE de maneira dose-dependente, com uma DE50 de 150 mg/kg. Houve redução ainda na angiogênese peritonial, na produção de VEGF e o tratamento não alterou significativamente os parâmetros hematológicos e bioquímicos dos animais. O tratamento in vitro também apresentou atividade antiproliferativa e citotóxica concentração-dependente, aumentou a expressão da proteína p53 e ativou a via da p53 (através da ativação das proteínas p21 e p27 e redução da MDM2). O composto também causou retenção das células na fase G1 do ciclo celular e levou as células à apoptose. A apoptose ainda foi observada pela morfologia das células, pela fragmentação de DNA, pela externalização da fosfatidilserina e pela ativação de caspases iniciadoras e efetoras. A transcrição do gene p53 não foi afetada pelo LQFM030, indicando que a regulação da p53 foi pós-transcricional. Assim como os nutlins, LQFM030 apresentou atividade antitumoral in vivo e antiproliferativa in vitro, provavelmente por inibir a interação p53-MDM2 e reativar p53 com suas principais funções, a retenção no ciclo celular e a apoptose. Esses resultados sugerem que LQFM030 é um interessante candidato no desenvolvimento de novos agentes terapêuticos antitumorais.eng
dc.description.sponsorshipCoordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPESeng
dc.formatapplication/pdf*
dc.identifier.citationMOTA, Mariana Flávia da. Avaliação da atividade antiproliferativa in vitro e antitumoral in vivo do composto LQFM030 no tumor ascítico de Ehrlich. 2013. 123 f. Tese (Doutorado em Ciências da Saúde) - Universidade Federal de Goiás, Goiânia, 2013.eng
dc.identifier.urihttp://repositorio.bc.ufg.br/tede/handle/tede/9894
dc.languageporeng
dc.publisherUniversidade Federal de Goiáseng
dc.publisher.countryBrasileng
dc.publisher.departmentFaculdade de Medicina - FM (RG)eng
dc.publisher.initialsUFGeng
dc.publisher.programPrograma de Pós-graduação em Ciências da Saúde (FM)eng
dc.rightsAcesso Aberto
dc.rights.urihttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
dc.subjectLQFM030por
dc.subjectNutli.por
dc.subjectApoptosepor
dc.subjectP53por
dc.subjectMDM2por
dc.subjectTumor ascítico de Ehrlichpor
dc.subjectApoptosiseng
dc.subjectEhrlich ascites tumoreng
dc.subject.cnpqCIENCIAS DA SAUDEeng
dc.titleAvaliação da atividade antiproliferativa in vitro e antitumoral in vivo do composto LQFM030 no tumor ascítico de Ehrlicheng
dc.title.alternativeEvaluation ofantiproliferative activity in vitro and antitumor activity in vivo of the LQFM030 compound in the Ehrlich ascites tumoreng
dc.typeTeseeng

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