Carbendazim induz morte em células epiteliais alveolares: cultura celular submersa e em interface ar-líquido

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dc.contributor.advisor1Valadares, Marize Campos
dc.contributor.advisor1Latteshttp://lattes.cnpq.br/6157755243167018eng
dc.contributor.referee1Valadares, Marize Campos
dc.contributor.referee2Biancardi , Manoel Francisco
dc.contributor.referee3Silva , Luís Antônio Dantas da
dc.contributor.referee4Oliveira , Gisele Augusto Rodrigues de
dc.creatorTollstadius, Bruna Ferreira
dc.creator.Latteshttp://lattes.cnpq.br/8615052574972995eng
dc.date.accessioned2020-02-05T11:03:14Z
dc.date.issued2019-03-21
dc.description.abstractIntroduction: The fungicide Carbendazim is widely used in agriculture and preservation of films and fibers. It’s well stablished that in mammals it can promote germ cell mutagenicity, carcinogenicity, and reproductive toxicity. However, few data about the effects of this toxicant upon the respiratory system are available. Objectives: Evaluate Carbendazim toxicity upon A549 alveolar cells in monolayer, as well as on a reconstructed alveolar epithelial model using 3D culture strategy. Methodology: Carbendazim cytotoxicity upon A549 cells was assessed through MTT reduction method. For mechanistic studies, also performed on monolayer, cells were exposed to the fungicide (12.5µM) for 24 hours, analyzed by flow cytometry, being investigated for cell cycle progression, ROS generation, and apoptosis potential induction. For 3D model obtention, A549 cell were cultivated on transwell inserts, upon collagen type I matrix, on an air-liquid interface for two days. The 3D model was then characterized usingindirect immunofluorescence, and evaluated for citokeratin, CD44, MUC-1, α-tubulin and E- cadherine expression, which showing a similar expression pattern to the human alveoli. After characterized, this model was exposed to Carbendazim (12.5µM) on the exposure chamber with aerosol production, and assessed for Nrf2, Cleaved Caspase-3 and α-tubuline expression by indirect immunofluorescence, as well as the mitochondrial activity and ROS generation.eng
dc.description.provenanceSubmitted by Marlene Santos (marlene.bc.ufg@gmail.com) on 2020-02-04T18:26:13Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Bruna Ferreira Tollstadius -2019.pdf: 5194670 bytes, checksum: 9a78797d898b0573cb4c48f4bc66ea50 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5)eng
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dc.description.resumoIntrodução: O fungicida Carbendazim é amplamente utilizado na agricultura e para a preservação de filmes e fibras. Está bem estabelecido que em mamíferos este fungicida promove mutagenicidade de células germinativas, carcinogenicidade, e toxicidade reprodutiva. Entretanto poucos dados estão disponíveis sobre os efeitos no sistema respiratório. Objetivo: Avaliar a toxicidade do Carbendazim frente às células alveolares A549 em monocamada, bem como sobre modelo epitelial alveolar reconstruído empregando-se estratégia de cultura em 3D. Metodologia: A citotoxicidade do Carbendazim foi avaliada através do método de redução do MTT. Para os estudos mecanísticos, também realizados em monocamada, tais células foram expostas ao fungicida (12,5µM) por 24 horas, analisadas por citometria de fluxo, sendo investigados a progressão celular, geração de espécies reativas de oxigênio (ROS) e o potencial indutor de apoptose. Para a obtenção do modelo 3D, as células A549 foram cultivadas em insertos transwell, sobre matriz de colágeno tipo I, em interface ar-líquido por dois dias. O modelo 3D foi então caracterizado utilizando-se a técnica de imunofluorescência indireta, sendo avaliadas a expressão das proteínas citoqueratina, CD44, MUC-1, α-tubulina e E-caderina, as quais apresentaram padrão de expressão similar ao tecido alveolar humano. Uma vez caracterizado, este modelo foi exposto ao Carbendazim (12,5µM) na câmara de exposição com produção de aerossóis, sendo avaliadas a expressão de Nrf2, Caspase-3 clivada e α-tubulina por imunofluorescência indireta, bem como a atividade mitocondrial e geração de ROS. Resultados e discussões: Células em monocamada expostas ao Carbendazim mostraram retenção das células na fase G2/M, entretanto, nas demais investigações não foi observado alterações. Por outro lado, após exposição do modelo epitelial alveolar a aerossóis de Carbendazim, por meio da câmara de nebulização, o Carbendazim aumentou a expressão de Caspase-3 clivada, α-tubulina e ROS significativamente, observando-se ainda expressão positiva do fator de transcrição Nrf2. Além disso, houve redução na atividade mitocondrial. Conclusões: Os resultados indicam que o Carbendazim é citotóxico para as células alveolares pulmonares e que a forma de exposição e o modelo biológico de estudo impactam consideravelmente na resposta celular para avaliação in vitro do perfil de toxicidade inalatória, sendo observado alterações significativas no modelo alveolar 3D expostas ao Carbendazim.eng
dc.description.sponsorshipConselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPqeng
dc.description.sponsorshipCoordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPESeng
dc.formatapplication/pdf*
dc.identifier.citationTOLLSTADIUS, Bruna Ferreira. Carbendazim induz morte em células epiteliais alveolares: cultura celular submersa e em interface ar-líquido. 2019. 60 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Farmacêuticas) - Universidade Federal de Goiás, Goiânia, 2019.eng
dc.identifier.urihttp://repositorio.bc.ufg.br/tede/handle/tede/10345
dc.languageporeng
dc.publisherUniversidade Federal de Goiáseng
dc.publisher.countryBrasileng
dc.publisher.departmentFaculdade Farmácia - FF (RG)eng
dc.publisher.initialsUFGeng
dc.publisher.programPrograma de Pós-graduação em Ciências Farmacêuticas (FF)eng
dc.rightsAcesso Aberto
dc.rights.urihttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
dc.subjectCarbendazimpor
dc.subjectToxicidade inalatóriapor
dc.subjectModelo epitelial alveolar 3Dpor
dc.subjectExposição por nebulizaçãopor
dc.subjectInterface ar-líquidopor
dc.subjectInhalation toxicityeng
dc.subjectAlveolar 3D epithelial modeleng
dc.subjectNebulization exposureeng
dc.subjectAir-liquid interfaceeng
dc.subject.cnpqFARMACOLOGIA::TOXICOLOGIAeng
dc.titleCarbendazim induz morte em células epiteliais alveolares: cultura celular submersa e em interface ar-líquidoeng
dc.typeDissertaçãoeng

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