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Tipo do documento: Artigo
Título: Construção de iniciadores e otimização de ensaios de pcr e de nested-pcr para a detecção específica de Tritrichomonas foetus
Autor: Fernandes, Paula Rogério
Silva, Andréa Caetano da
Gambarini, Maria Lúcia
Linhares, Guido Fontgalland Coelho
Resumo: Tritrichomonas foetus é um protozoário patogênico responsável por doença venérea em bovinos conhecida por tricomonose genital bovina. A tricomonose bovina é uma doença venérea causada pelo protozoário cujo habitat natural é o trato genital. Os protocolos já desenvolvidos para o diagnóstico deste parasito por PCR, apesar de serem eficazes na identificação do DNA genômico alvo, promovem algumas amplificações inespecíficas ou são incapazes de distinguir T. foetus das outras espécies do gênero. O presente trabalho foi desenvolvido com o objetivo de estabelecer e otimizar protocolos de ensaio de PCR e nested-PCR para o diagnóstico específico de T. foetus, empregando-se novos iniciadores, selecionados do alinhamento das seqüências dos genes 18S rRNA, 5,8S rRNA, 28S rRNA e dos espaços transcritos do rDNA (ITS1 e ITS2). Um par de iniciadores foi construído para amplificação gênero-específica de um fragmento de 648 pares de base e outros dois para a obtenção de produtos espécieespecíficos de 343 e 429 pb. Nenhuma reação cruzada foi observada frente ao DNA genômico de Bos taurus ou de microrganismos responsáveis por infecções genitais. A sensibilidade dos ensaios de PCR e de nested-PCR apresentados neste estudo permitiu um limiar de detecção de até dois parasitos.
Abstract: Tritrichomonas foetus is a pathogenic protozoan that causes a venereal disease in cattle known as bovine genital tricomonosis. In spite of the efficacy to recognize the target genomic DNA, the protocols so far developed for the diagnosis of this organism by PCR promote some inespecific amplifications or they are unable to discriminate T. foetus against other species within the genus. The objective of this study was to assess and optimize PCR and nested-PCR assays for the specific diagnosis of T. foetus, using novel primers selected from the alignment of sequences of the genes 18S rRNA, 5.8S rRNA, 28S rRNA and of the internal transcribed spacers of the rDNA (ITS1 and ITS2). A pair of primers was constructed for the genus-specific amplification of a 648 bp fragment and two others to amplify T. foetus species-specific fragments of 343 and 429 bp. No cross amplification was observed against Bos taurus genomic DNA neither against the DNA of usual bovine genital pathogens. Both, single and nested-PCR assays, presented analytical sensitivity to detect at least two T. foetus organisms.
Palavras-chave: Reação em cadeia da polimerase
DNAr
Diagnóstico molecular
Tricomonose
Bovinos
Polymerase chain reaction
rDNA
Molecular diagnosis
Trichomonosis
Bovine
País: Brasil
Unidade acadêmica: Escola de Veterinária e Zootecnia - EVZ (RG)
Citação: FERNANDES, Paula Rogério; SILVA, Andréa Caetano da; GAMBARINI, Maria Lúcia; LINHARES, Guido Fontgalland Coelho. Construção de iniciadores e otimização de ensaios de pcr e de nested-pcr para a detecção específica de Tritrichomonas foetus. Revista Brasileira de Parasitologia Veterinária, v. 17, n. 3, Jaboticabal, p. 133-138, jul./set. 2008.
Tipo de acesso: Acesso Aberto
Identificador do documento: 10.1590/S1984-29612008000300003
Identificador do documento: 10.1590/S1984-29612008000300003
URI: http://repositorio.bc.ufg.br/handle/ri/13648
Data de publicação: Set-2008
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