Caracterização de proteases secretadas por Sclerotinia sclerotiorum

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dc.contributor.advisor1Silva, Silvana Petrofeza da
dc.contributor.advisor1Latteshttp://lattes.cnpq.br/6823998544968373eng
dc.contributor.referee1Silva, Silvana Petrofeza da
dc.contributor.referee2Andrade, Rosangela Vieira de
dc.contributor.referee3Faria, Fabrícia Paula de
dc.creatorAlves, Elda Bueno
dc.creator.Latteshttp://lattes.cnpq.br/3943851675463396eng
dc.date.accessioned2019-02-20T12:54:42Z
dc.date.issued2019-05-25
dc.description.abstractSclerotinia sclerotiorum is a fungus that infects many economically important plants. The production of oxalic acid, decreased the pH of the medium and the secretion of hydrolytic enzymes such as proteases, are determining factors for the infection of this pathogen. Proteases secreted by the fungus S. sclerotiorum degrade the cell wall proteins of the host and antifungal proteins secreted by the plant during the invasion. This study aimed to characterize molecular and biochemical proteases in S. sclerotiorum, during the invasion in bean plants (Phasheolus vulgaris L.) and in culture medium supplemented with pectin, the wall of bean extract and glucose as carbon sources. The secretion of these proteases was detected by enzymatic assays with specific inhibitors and buffered media at different pH. The level of expression of genes encoding for the protease aspartyl (aspS) and acid protease (acp1), respectively, were detected by qRT-PCR technique. Enzyme activity was detected in all sources of carbon, but higher levels were found when pectin was used as the sole carbon source. Tests with different proteolytic inhibitors showed that Pepstatin A specific inhibitor for aspartyl protease-inhibitor that has been the greatest action in culture media, indicating the probable secretion of aspartyl proteases. Of qRT-PCR experiments showed that the expression of genes aspS and acp1 was increased in S. sclerotiorum both in culture medium supplemented with pectin or extract of the cell wall of bean, as during the infection in bean seedlings. These results suggest that the fungus secret proteases during the infection of the host plant. And the different carbon sources evaluated, similar to components of the cell wall of host plants, are effective for the induction of gene expression (acp1 and aspS) in S. sclerotiorum. Thus, the proteases have been considered an important virulence factor in increasing the efficiency of fungal attack in plants.eng
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dc.description.resumoSclerotinia sclerotiorum é um fitopatogeno que infecta muitas plantas economicamente importantes. A produção de ácido oxálico, diminuição do pH do meio e a secreção de enzimas hidrolíticas, como as proteases, são fatores determinantes para a infecção deste patógeno. Proteases secretadas pelo fungo S. sclerotiorum degradam proteínas da parede celular do hospedeiro e proteínas antifúngicas secretadas pela planta durante o processo de invasão. Este trabalho teve como objetivo caracterizar molecular e bioquimicamente proteases em S. sclerotiorum, durante o processo de invasão em plantas de feijoeiro (Phasheolus vulgaris L.) e em meio de cultura suplementados com pectina, extrato de parede de feijoeiro e glicose, como fontes de carbono. A secreção destas proteases foi detectada por meio de ensaios enzimáticos com inibidores específicos e meios tamponados em diferente pH. O nível de expressão dos genes que codificam para a aspartil protease (aspS) e a protease acida (acp1), respectivamente, foram detectados através da técnica qRT-PCR. Atividade enzimática foi verificada em todas as fontes de carbono, mas níveis mais altos foram encontrados quando foi utilizado pectina como única fonte de carbono. Ensaios proteolíticos com diferentes inibidores mostraram que Pepstatin A inibidor específico para aspartil proteases, foi o inibidor que teve maior ação nos meios de cultura analisados, indicando a secreção de prováveis aspartyl proteases. Experimentos de qRT-PCR mostrou que a expressão dos genes aspS e acpc1 foi aumentados em S. sclerotiorum tanto em meio de cultura suplementados com pectina ou extrato de parede celular de feijoeiro, quanto durante a infecção em plântulas de feijoeiro. Estes resultados sugerem que o fungo secreta proteases durante a infecção da planta hospedeira. E as diferentes fontes de carbono avaliadas, similares a componentes da parede celular de plantas hospedeiras, são efetivas para a indução da expressão gênica (aspS e acp1) em S. sclerotiorum. Desta forma, as proteases têm sido consideradas um importante fator de virulência aumentando a eficiência do fungo no ataque a plantas.eng
dc.formatapplication/pdf*
dc.identifier.citationALVES, E. B. Caracterização de proteases secretadas por Sclerotinia sclerotiorum. 2019. 50 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Biológicas) - Universidade Federal de Goiás, Goiânia, 2009.eng
dc.identifier.urihttp://repositorio.bc.ufg.br/tede/handle/tede/9294
dc.languageporeng
dc.publisherUniversidade Federal de Goiáseng
dc.publisher.countryBrasileng
dc.publisher.departmentInstituto de Ciências Biológicas - ICB (RG)eng
dc.publisher.initialsUFGeng
dc.publisher.programPrograma de Pós-graduação em Ciências Biológicas (ICB)eng
dc.rightsAcesso Aberto
dc.rights.urihttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
dc.subjectProteinasepor
dc.subjectPhaseolus vulgarispor
dc.subjectSclerotinia sclerotiorumpor
dc.subjectMofo brancopor
dc.subjectFontes de carbonopor
dc.subjectExpressãopor
dc.subjectProteinasepor
dc.subjectPhaseolus vulgariseng
dc.subjectSclerotinia sclerotiorumeng
dc.subjectWhite moldeng
dc.subjectCarbon sourceseng
dc.subjectThe gene expressioneng
dc.subject.cnpqBIOQUIMICA::BIOLOGIA MOLECULAReng
dc.thumbnail.urlhttp://repositorio.bc.ufg.br/tede/retrieve/52501/Disserta%c3%a7%c3%a3o%20-%20Elda%20Bueno%20Alves%20-%202009.pdf.jpg*
dc.titleCaracterização de proteases secretadas por Sclerotinia sclerotiorumeng
dc.title.alternativeCharacterization of proteases secreted by Sclerotinia sclerotiorumeng
dc.typeDissertaçãoeng

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