Caracterização in silico, estudo da atividade e avaliação do papel da PKA na transição morfológica de Paracoccidioides lutzii

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dc.contributor.advisor-co1Brito, Wesley de Almeida
dc.contributor.advisor-co1Latteshttp://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4782643Y1eng
dc.contributor.advisor1Furlaneto, Silvia Maria Salem Izacc
dc.contributor.advisor1Latteshttp://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4728477P4eng
dc.contributor.referee1Furlaneto, Silvia Maria Salem Izacc
dc.contributor.referee2Faria, Fabrícia Paula de
dc.contributor.referee3Bailão, Mirelle Garcia Silva
dc.creatorSestari, Sheila Janaina
dc.creator.Latteshttp://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4309902H4eng
dc.date.accessioned2018-07-18T11:28:17Z
dc.date.issued2017-03-10
dc.description.abstractParacoccidioides lutzii alternates between filamentous and yeast growth when exposed to temperatures of 36ºC. Morphological transition is an essential event for establishment of paracoccidioidomycosis (PCM), one of the most frequent systemic mycoses in Latin America. Paracoccidioides brasiliensis and other dimorphic fungi, cAMP-dependent protein kinase (PKA) is essential in the dimorphic process. However, molecular events responsible for mycelial-yeast differentiation in P. lutzii remain unknown. The aim of this work was to characterize in silico the PKA subunits of P. lutzii, and to evaluate the role of this enzyme during the morphological transition of this fungus. During the in silico approach, we used computational tools for identity, domains, cell localization prediction, and similarity between P. lutzii and human sequences analysis. The importance of this enzyme was investigated through the use of specific inhibitor, H89. The behavior of cells in the presence of the drug was observed and the PKA activity measured by specific kit. Our in silico results reveal a single regulatory subunit, PbPKA-R located primarily in the nucleus, and two catalytic subunits, PbPKA-C1 and PbPKA-C2, with localization in the cytoplasm and nucleus respectively, all highly conserved. The PbPKA-R subunits were identified with two copies of the CNMP domain in the C-terminal, while the catalytic with a single copy of two domains: protein kinase and AGC kinase. The alignment of the PKA catalytic subunits of humans and Paracoccidioides shows a large divergence between them, making PKA an interesting target for antifungal. The results show that PKA activity is phase regulated, being about five times higher in yeast than in mycelium. We also show that H89 blocks the mycelium to yeast differentiation when PKA activity decreases. However, when the drug is removal from the culture medium, the fungus resumes the differentiation to the yeast phase. Our results show that PKA activity affects the phase transition in P. lutzii.eng
dc.description.provenanceSubmitted by Marlene Santos (marlene.bc.ufg@gmail.com) on 2018-07-17T17:09:33Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Sheila Janaína Sestari - 2017.pdf: 2781342 bytes, checksum: 55b64ac559e09fb7b078b0906ccd9791 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5)eng
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dc.description.resumoParacoccidioides lutzii alterna entre crescimento filamentoso e leveduriforme quando exposto a temperaturas de 36ºC. A transição morfológica é um evento essencial para estabelecimento da paracoccidioidomicose (PCM), uma das micoses sistêmicas mais frequentes na América Latina. Em Paracoccidioides brasiliensis e outros fungos dimórficos, a proteína quinase dependente de AMPc (PKA) é essencial no processo dimórfico. No entanto, os eventos moleculares responsáveis pela diferenciação micélio-levedura em P. lutzii permanecem desconhecidos. O objetivo deste trabalho foi caracterizar in silico as subunidades da PKA de P. lutzii, e avaliar o papel dessa enzima durante a transição morfológica desse fungo. Durante a abordagem in silico, utilizamos ferramentas computacionais para análise de identidade, domínios, predição da localização celular e similaridade entre as sequências de P. lutzii e humanos. Para investigar a importância dessa enzima, utilizamos um inibidor específico, H89, observando o comportamento das células quando induzidas à transição morfológica e posteriormente mensuramos sua atividade através de kit específico. Nossos resultados in silico revelam uma única subunidade regulatória, PbPKA-R localizada principalmente no núcleo, e duas subunidades catalíticas, PbPKA-C1 e PbPKA-C2, com localização no citoplasma e núcleo respectivamente, todas altamente conservadas. Na região Cterminal, as subunidades PbPKA-R foram identificadas com duas cópias do domínio CNMP, já as catalíticas com uma única cópia de dois domínios: proteína quinase e AGC quinase. O alinhamento das subunidades catalíticas da PKA de humanos e Paracoccidioides aponta uma grande divergência entre elas, o que torna a PKA um alvo interessante para antifúngicos. Os resultados do ensaio de atividade da PKA mostram que a atividade é regulada ao longo da transição de fases, sendo cerca de cinco vezes maior em levedura do que em micélio. Os dados também evidenciam que H89 bloqueia a diferenciação de micélio para levedura e que este bloqueio acontece concomitantemente à diminuição da atividade da PKA. No entanto, quando a droga é retirada do meio de cultura, o fungo retoma a diferenciação para fase leveduriforme. Os resultados revelam que a atividade da PKA afeta a transição de fases em P. lutzii.eng
dc.description.sponsorshipCoordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPESeng
dc.formatapplication/pdf*
dc.identifier.citationSESTARI, Sheila Janaína. Caracterização in silico, estudo da atividade e avaliação do papel da PKA na transição morfológica de Paracoccidioides lutzii. 2017. 54 f. Dissertação (Mestrado em Genética e Biologia Molecular) - Universidade Federal de Goiás, Goiânia, 2017.eng
dc.identifier.urihttp://repositorio.bc.ufg.br/tede/handle/tede/8711
dc.languageporeng
dc.publisherUniversidade Federal de Goiáseng
dc.publisher.countryBrasileng
dc.publisher.departmentInstituto de Ciências Biológicas - ICB (RG)eng
dc.publisher.initialsUFGeng
dc.publisher.programPrograma de Pós-graduação em Genética e Biologia Molecular (ICB)eng
dc.rightsAcesso Aberto
dc.rights.urihttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
dc.subjectParacoccidioides lutziipor
dc.subjectTransição morfológicapor
dc.subjectPKApor
dc.subjectH89por
dc.subjectMorphological transitioneng
dc.subject.cnpqCIENCIAS BIOLOGICAS::GENETICAeng
dc.titleCaracterização in silico, estudo da atividade e avaliação do papel da PKA na transição morfológica de Paracoccidioides lutziieng
dc.title.alternativeIn silico characterization, activity study and role evaluation of PKA in morphological transition of Paracoccidioides lutziieng
dc.typeDissertaçãoeng

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