Efeito neuroprotetor e antiepiléptico da infusão intracerebroventricular crônica de angiotensina-(1-7) em ratos com epilepsia do lobo temporal

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dc.contributor.advisor-co1Castro, Carlos Henrique de
dc.contributor.advisor-co1Latteshttp://lattes.cnpq.br/6354834854727314pt_BR
dc.contributor.advisor1Colugnati, Diego Basile
dc.contributor.advisor1Latteshttp://lattes.cnpq.br/3875833705952056pt_BR
dc.contributor.referee1Colugnati, Diego Basile
dc.contributor.referee2Torres, Bruno Benetti Junta
dc.contributor.referee3Pedrino, Gustavo Rodrigues
dc.contributor.referee4Blanch, Graziela Torres
dc.contributor.referee5Menegatti, Ricardo
dc.creatorGomes, Karina Pereira
dc.creator.Latteshttp://lattes.cnpq.br/1378267964767805pt_BR
dc.date.accessioned2022-08-22T12:25:08Z
dc.date.available2022-08-22T12:25:08Z
dc.date.issued2020-03-02
dc.description.abstractEpilepsy is a severe neurological disorder characterized by permanent predisposition of the brain to generate spontaneous and recurrent seizures. Temporal Lobe Epilepsy (TLE) is the most frequent type of epilepsy in adults and is often refractory to pharmacological treatments available. Recently, several neuropeptides and their receptors have been suggested as promising therapeutic targets for the treatment of epilepsy, including neuropeptides and receptors of the Renin Angiotensin System (RAS). The aim of this study was to evaluate the effects of chronic treatment with Angiotensin-(1-7) (Ang-(1-7)) in male Wistar rats with TLE. The Pilocarpine (PILO) model was used for TLE induction and after the first spontaneous seizure, the animals were submitted to stereotactic surgery for implant of a guide cannula attached to an osmotic minipump. Rats of control group (CT) underwent the same procedures as the rats of groups with epilepsy, but were resistant to PILO model, not developing ELT. Intracerebroventricular infusion of Ang-(1-7) (200ng/kg/h) or sterile saline solution (NaCl 0.9%) was performed for 30 days and body weight, feed intake and spontaneous seizures were evaluated. At the end of the treatment, behavioral tests were performed in Elevated Plus Maze (EPM) and Open Field (OF) for evaluation of anxiety-like behavior and locomotor/exploratory activity. In the next day after behavioral tests, the animals were euthanized and the hippocampus were dissected, stored and later processed for protein analysis using Western Blot technique. For RAS components investigation, protein levels of Angiotensin Converting Enzyme 2 (ACE2) and Neutral Endopeptidase (NEP), as well as AT1, AT2 and Mas receptors were evaluated. In addition, hippocampal levels of Interleukin-6 (IL-6), Superoxide Dismutase (SOD), Catalase (CAT), B-Cell Lymphoma 2 (Bcl-2) and the phosphorylation of Mammalian Target of Rapamycin (mTOR) were quantified. Chronic intracerebroventricular treatment with Ang-(1-7) significantly reduced the frequency of spontaneous epileptic seizures, mainly at light photoperiod of the light-dark cycle, without changing its duration. Saline treated TLE rats (EP) showed significantly lower body weight gain than control rats without epilepsy (CT), which was attenuated in the last two weeks by Ang- (1-7) treatment (EP + Ang-(1-7)). However, the feed intake did not differ among evaluated groups. The time spent in EPM open arms by EP group was significantly higher than CT group, an effect attenuated by Ang-(1-7) treatment. In addition, the total number of entries in EPM arms was higher in EP group, which was reversed in EP + Ang-(1-7) group. The number of crossings in OF was significantly higher in EP group, which was reversed by Ang-(1-7) treatment. However, the immobility time and the numbers of rearing, also increased in the EP group, were only attenuated by Ang-(1- 7) treatment. Our results, revealed that Ang-(1-7) positively regulated the antioxidant protein CAT, the anti-apoptotic protein Bcl-2 and also increased the phosphorylation of anti-apoptotic protein mTOR, all reduced by epilepsy in hippocampus. In addition, the upregulation of AT1 receptor induced by TLE in hippocampus was also attenuated by treatment with Ang-(1-7). The protein levels of ACE2, NEP and SOD enzymes, as well as AT2 receptor and IL-6 were not statistically different between the groups. Mas receptor was downregulated in hippocampus of EP + Ang-(1-7) group. Our data suggest that Ang-(1-7) has direct modifying effects on chronic TLE by reducing oxidative stress and hippocampal neuronal death. From these results we can conclude that chronic intracerebroventricular treatment with Ang-(1-7) in rats with PILO induced- TLE reduces hippocampal neuronal damage and the frequency of spontaneous seizures, attenuating the damage in body weight gain and behavioral abnormalities. This study provides evidence that Ang-(1-7) and its receptor are promising targets for the treatment of TLE and its comorbidities.eng
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dc.description.resumoA epilepsia é um distúrbio neurológico grave caracterizado pela predisposição permanente do encéfalo em gerar crises epilépticas espontâneas e recorrentes. Dentre as epilepsias refratárias ao tratamento farmacológico disponível até o momento, a Epilepsia do Lobo Temporal (ELT) é a mais frequente em adultos. Nos últimos anos, diversos neuropeptídeos e seus receptores têm sido sugeridos como alvos terapêuticos promissores para o tratamento da epilepsia e das comorbidades a ela relacionadas. Entre eles estão os neuropeptídeos e receptores do Sistema Renina Angiotensina (SRA). O objetivo desse trabalho consistiu em avaliar os efeitos do tratamento crônico com a Angiotensina-(1-7) (Ang-(1-7)) em ratos Wistar com ELT. O modelo da Pilocarpina (PILO) foi utilizado para indução da ELT e após a primeira crise epiléptica espontânea, os animais foram submetidos à estereotaxia para implante de cânula guia ligada a minibomba osmótica. Os ratos do grupo controle (CT) foram submetidos aos mesmos procedimentos que os animais dos grupos com epilepsia, porém foram resistentes ao modelo da PILO, não desenvolvendo a ELT. A infusão intracerebroventricular de Ang-(1-7) (200ng/kg/h) ou salina estéril (NaCl 0,9%) foi realizada durante 30 dias e durante esse período avaliamos o peso corporal, a ingestão de ração e as crises epilépticas espontâneas dos animais. Ao final do tratamento foram realizados testes comportamentais no Labirinto em Cruz Elevado (LCE) e no Campo Aberto (CA), para avaliação do comportamento tipo ansiedade e da atividade locomotora/exploratória. No dia seguinte às análises comportamentais, os animais foram submetidos a eutanásia e os hipocampos foram dissecados, armazenados e posteriormente processados para análise proteica através da técnica de Western Blot. Para a investigação dos componentes do SRA, os níveis proteicos da Enzima Conversora de Angiotensina 2 (ECA2) e da Endopeptidase Neutra (NEP), bem como dos receptores AT1, AT2 e Mas foram avaliados. Os níveis hipocampais de Interleucina-6 (IL-6), Superóxido Dismutase (SOD), Catalase (CAT), Linfoma de Célula-B 2 (Bcl-2) e a fosforilação da Proteína Alvo da Rapamicina em Mamíferos (mTOR) também foram quantificados. O tratamento intracerebroventricular crônico com a Ang-(1-7) reduziu significativamente a frequência de crises epilépticas espontâneas, principalmente no fotoperíodo claro do ciclo claro-escuro, sem alterar a sua duração. Durante o tratamento, os ratos com ELT tratados com salina (EP) apresentaram ganho de peso corporal significativamente menor que os ratos controles sem epilepsia (CT), o que foi atenuado nas duas últimas semanas de tratamento com a Ang-(1-7) (EP + Ang-(1-7)). Entretanto, a quantidade ingerida de ração não diferiu entres os grupos avaliados. No LCE o tempo dispendido nos braços abertos pelo grupo EP foi significativamente maior que o grupo CT, efeito atenuado pelo tratamento com a Ang-(1-7). Além disso, o número total de entradas nos braços do LCE foi maior no grupo EP, revertendo-se no grupo EP + Ang-(1-7). No CA o número de cruzamentos foi significativamente maior no grupo EP, revertendo-se também com o tratamento. No entanto, o tempo de imobilidade e o número de levantadas também aumentados no grupo EP foram apenas atenuados com o tratamento com a Ang-(1- 7). O tratamento com a Ang-(1-7) regulou positivamente os níveis da proteína antioxidante CAT e da proteína anti-apoptótica Bcl-2, além de aumentar a fosforilação da proteína anti-apoptótica mTOR, reduzidas pela epilepsia no hipocampo. A regulação positiva do receptor AT1 induzida pela ELT no hipocampo também foi atenuada pelo tratamento com a Ang-(1-7). Os níveis proteicos das enzimas ECA2, NEP e SOD, bem como do receptor AT2 e da IL-6 não foram estatisticamente diferentes entre os grupos avaliados. Já o receptor Mas foi regulado negativamente no hipocampo no grupo EP + Ang-(1-7). Nossos dados sugerem que a Ang-(1-7) exerce efeitos modificadores diretos na ELT crônica através da redução do estresse oxidativo e da morte neuronal hipocampal. A partir desses resultados podemos concluir que o tratamento intracerebroventricular crônico com Ang-(1-7) em ratos com ELT induzida pela PILO reduz o dano neuronal hipocampal e a frequência de crises epilépticas espontâneas, atenuando o prejuízo no ganho de peso corporal e as anormalidades comportamentais provocados pela epilepsia. O presente estudo fornece evidências de que a Ang-(1-7) e seu receptor são alvos promissores para o tratamento da ELT e suas comorbidades.pt_BR
dc.description.sponsorshipCoordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPESpt_BR
dc.identifier.citationGOMES, K. P. Efeito neuroprotetor e antiepiléptico da infusão intracerebroventricular crônica de angiotensina-(1-7) em ratos com epilepsia do lobo temporal. 2020. 84 f. Tese (Doutorado em Ciências Biológicas) - Universidade Federal de Goiás,Goiânia, 2020.pt_BR
dc.identifier.urihttp://repositorio.bc.ufg.br/tede/handle/tede/12280
dc.languageporpt_BR
dc.publisherUniversidade Federal de Goiáspt_BR
dc.publisher.countryBrasilpt_BR
dc.publisher.departmentInstituto de Ciências Biológicas - ICB (RG)pt_BR
dc.publisher.initialsUFGpt_BR
dc.publisher.programPrograma de Pós-graduação em Ciências Biológicas (ICB)pt_BR
dc.rightsAttribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 International*
dc.rights.urihttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/*
dc.subjectSistema renina angiotensinapor
dc.subjectPilocarpinapor
dc.subjectCrises epilépticaspor
dc.subjectComportamentopor
dc.subjectApoptosepor
dc.subjectRenin-angiotesin systemeng
dc.subjectPilocarpineeng
dc.subjectSeizureseng
dc.subjectBehavioreng
dc.subjectApoptosiseng
dc.subject.cnpqCIENCIAS BIOLOGICAS::FARMACOLOGIApt_BR
dc.titleEfeito neuroprotetor e antiepiléptico da infusão intracerebroventricular crônica de angiotensina-(1-7) em ratos com epilepsia do lobo temporalpt_BR
dc.title.alternativeNeuroprotective and antiepileptic effect of chronic intracerebroventricular infusion of angiotensin-(1-7) in rats with temporal lobe epilepsyeng
dc.typeTesept_BR

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