Estudo do potencial citotóxico e do mecanismo de morte celular de novos protótipos à base de rutênio frente a diferentes células tumorais
| dc.contributor.advisor1 | Lacerda, Elisângela de Paula Silveira | |
| dc.contributor.referee1 | Lacerda, Elisângela de Paula Silveira | |
| dc.contributor.referee2 | Bérgamo, Nádia Aparecida | |
| dc.contributor.referee3 | Ayres, Flávio Monteiro | |
| dc.contributor.referee4 | Cortez, Alane Pereira | |
| dc.contributor.referee5 | Santos, Wagner Gouvêa dos | |
| dc.creator | Lima, Aliny Pereira | |
| dc.date.accessioned | 2025-03-10T21:42:17Z | |
| dc.date.available | 2025-03-10T21:42:17Z | |
| dc.date.issued | 2014 | |
| dc.description.abstract | Currently ruthenium complexes have demonstrated interesting anticancer properties and may represent new and effective therapeutic agents for use as drugs alternative to platinum drugs. The present study aimed to investigate in vitro the cytotoxic and pro-apoptotic effect of the ruthenium complex cis-(dichloro)tetrammineruthenium(III) chloride against human lung alveolar carcinoma (A549) and complexes of ruthenium (II) coordinated to different amino acids against Sarcoma 180 tumor cells through the techniques of cell viability assay, kinetics of cell cycle phases assay, annexin V/propidium iodide assay, mitochondrial membrane potential assay, gene expression by real time PCR assay and western blotting assay. The cell viability assay by MTT reduction technique, it was found that complexes of ruthenium (II) coordinated to amino acids showed cytotoxic activity against S180 tumor cells with IC50 values ranging from 22.53 to 70.08 µM. For ruthenium complex (III) cis- (dichloro)tetrammineruthenium(III) chloride the IC50 value against A549 tumor cells was greater than 383 µM (IC50> 383 mM). Additionally, it was observed that complexes of ruthenium (II) exhibited low cytotoxicity on normal cells of mouse fibroblast L929, with IC50 values ranging from 27.39 to 106.72 µM. The clonogenic assay was performed in A549 tumor cells, and by the results obtained it was found that at low concentrations of the complex cis-(dichloro)tetrammineruthenium(III) chloride (0.38 and 3.8 µM) there was a decrease in the ability of cells to form colonies and at high concentrations 95 and 383 µM there was no colonies formation In cell cycle analysis of S180 tumor cells treated with complex of ruthenium (II) RuGly the results showed that this complex increased the percentage of cells in G0/G1, which correlated with consequent reduction in the number of cells in S phase. To complex of ruthenium (III) cis-(dichloro)tetrammineruthenium(III) chloride against A549 tumor cells, it was found that this complex increased the percentage of cells in S phase. In the analysis of apoptosis assays, the results showed that the complex ruthenium (II) RuGly induced cell death via apoptosis in S180 tumor cells as evidenced by the increase in annexin V positive cells, depolarization of the mitochondrial membrane potential, activation of caspase 3, 8 and 9 and increased expression levels of Caspase-3 (mRNA) and Bax (mRNA) and Bak (protein). The expression of genes Caspase-8, Caspase-9 and Tp53 remained unchanged during the period of exposure examined. For complex ruthenium (III) induction of apoptosis on A549 cells was verified by the presence of annexin V positive cells and peak in sub-G1 (indicative of apoptosis) and increased levels of mRNA of Caspase 3. In addition cell death via necrosis was observed as verified by increased number of cells labeling with only propidium iodide. From the results it is concluded that both complexes of ruthenium (II) and (III) to induce cytotoxic activity against cell models tested and this activity correlates with alterations in cell cycle phases and induction of cell death via apoptosis and necrosis, being prototypes promising drugs against tumor models investigated. | eng |
| dc.description.resumo | Atualmente, complexos de rutênio têm demonstrado interessantes propriedades antineoplásicas, podendo representar novos e eficientes agentes terapêuticos a serem usados como fármacos alternativos a drogas de platina. O presente trabalho teve como objetivo investigar in vitro os efeitos citotóxico e pró-apoptótico do complexo cloreto de cis-tetraaminodiclororutênio(III) frente à linhagem tumoral de carcinoma alveolar de pulmão humano (A549) e dos complexos de rutênio (II) coordenados a diferentes aminoácidos frente à linhagem tumoral S180 por meio das técnicas de ensaio de viabilidade celular, ensaio de cinética das fases do ciclo celular, ensaio de anexina V/iodeto de propídeo, ensaio de potencial de membrana mitocondrial, expressão gênica por PCR em tempo real e ensaio de western blotting. Por meio do ensaio de viabilidade celular pela técnica de redução do MTT, verificou se que os complexos de rutênio (II) coordenados a aminoácidos apresentaram atividade citotóxica frente à linhagem tumoral S180 com valores de IC50 variando de 22,53 a 70,08 µM. Para o complexo de rutênio (III) cloreto de cis tetraaminodiclororutênio, o valor de IC50 frente à linhagem tumoral A549 foi maior que 383 µM (IC50 > 383 µM). Adicionalmente, foi observado que complexos de rutênio (II) coordenados a aminoácidos exibiram menor citotoxicidade sobre as células normais de fibroblasto de camundongo L929, com valores de IC50 variando de 27,39 a 106,72 µM. O ensaio clonogênico foi realizado em células tumorais A549 e, por meio dos resultados obtidos, verificou-se que em baixas concentrações do complexo cloreto de cis-tetraaminodiclororutênio (0,38 e 3,8 µM) houve diminuição na capacidade das células de formarem colônias e, em concentrações elevadas 95 e 383 µM, não houve a formação de colônias. Na análise do ciclo celular de células tumorais S180 tratadas com o complexo de rutênio (II) RuGly, os resultados demonstraram que esse complexo aumentou o percentual de células na fase G0/G1, o que correlacionou com consequente diminuição do número de células na fase S do ciclo celular. Já em relação à atuação do complexo de rutênio (III) cloreto de cis tetraaminodiclororutênio (III) frente à linhagem tumoral A549, verificou-se que este complexo aumentou o percentual de células na fase S. Na análise dos ensaios de apoptose, os resultados demonstraram que o complexo de rutênio (II) RuGly induziu morte celular via apoptose na linhagem tumoral S180, como evidenciado pelo aumento no número de células anexina V positivo, despolarização do potencial de membrana mitocondrial, ativação das caspase 3, 8 e 9 e aumento dos níveis de expressão de Caspase 3 (mRNA) e Bax (mRNA) e Bak (proteína). A expressão dos genes Caspase-8, Caspase-9 e Tp53 permaneceu inalterada no período de exposição analisado. Para o complexo rutênio (III), a indução de apoptose frente à linhagem A549 foi verificada através da presença de células anexina positiva e picos em sub-G1 (indicativo de apoptose) e aumento dos níveis de mRNA de Caspase 3. Além de morte celular via apoptose, observou-se que este complexo induziu morte por necrose, como verificado pelo aumento do número de células com marcação apenas para iodeto de propídeo. A partir dos resultados, conclui-se que ambos os complexos de rutênio (II) e (III) apresentam atividade citotóxica frente aos modelos de células testadas, sendo que essa atividade está correlacionada com alterações nas fases do ciclo celular e indução de morte celular via apoptose, sendo promissores protótipos á fármacos frente aos modelos tumorais investigados. | |
| dc.identifier.citation | LIMA, Aliny Pereira. Estudo do potencial citotóxico e do mecanismo de morte celular de novos protótipos à base de rutênio frente a diferentes células tumorais. Orientadora: Elisângela de Paula Silveira Lacerda. 2014. 107 f. Tese (Doutorado em Ciências Biológicas) - Instituto de Ciências Biológicas, Universidade Federal de Goiás, Goiânia, 2014. | |
| dc.identifier.uri | http://repositorio.bc.ufg.br/tede/handle/tede/13930 | |
| dc.language | por | |
| dc.publisher | Universidade Federal de Goiás | |
| dc.publisher.country | Brasil | |
| dc.publisher.department | Instituto de Ciências Biológicas - ICB (RMG) | |
| dc.publisher.initials | UFG | |
| dc.publisher.program | Programa de Pós-graduação em Ciências Biológicas (ICB) | |
| dc.rights | Acesso Embargado | |
| dc.subject | Apoptose | por |
| dc.subject | Ciclo Celular | por |
| dc.subject | Citotoxicidade | por |
| dc.subject | Complexos de Rutênio | por |
| dc.subject | Apoptosis | eng |
| dc.subject | Cell Cycle | eng |
| dc.subject | Cytotoxicity | eng |
| dc.subject | Ruthenium Complexes | eng |
| dc.subject.cnpq | CIENCIAS BIOLOGICAS::BIOQUIMICA::BIOLOGIA MOLECULAR | |
| dc.subject.cnpq | CIENCIAS BIOLOGICAS::MORFOLOGIA::CITOLOGIA E BIOLOGIA CELULAR | |
| dc.title | Estudo do potencial citotóxico e do mecanismo de morte celular de novos protótipos à base de rutênio frente a diferentes células tumorais | |
| dc.type | Tese |