Caracterização molecular da proteína histidina quinase de Paracoccidioides brasiliensis

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dc.contributor.advisor1Paccez, Juliano Domiraci
dc.contributor.advisor1Latteshttp://lattes.cnpq.br/2350706025601982eng
dc.contributor.referee1Paccez, Juliano Domiraci
dc.contributor.referee2Bailão, Alexandre Melo
dc.contributor.referee3Tomazett, Mariana Vieira
dc.creatorSantos, Dener Lucas Araújo dos
dc.creator.Latteshttp://lattes.cnpq.br/7447238034281782eng
dc.date.accessioned2019-04-09T15:52:00Z
dc.date.issued2019-03-08
dc.description.abstractProkaryotic and eukaryotic organisms (except those belonging to the phylum metazoa) have developed a system named phosphorelay, which is responsible for adaptation to different environmental conditions such as oxidative stress, osmotic stress and thermal shock. Studies have demonstrated that inhibition of hybrid histidine kinase, the stimulus sensory protein in the phosphorelay pathway, affects morphological transition from mycelial fungi to yeast. Among the thermodymorphic fungi, Paracoccidioides spp. are among the most prevalent in Latin America, mainly in Brazil, as the cause of the systemic mycosis paracoccidioidomycosis (PCM). The exposure of fungi from this complex to the host body temperature (37 ° C), leads to the transition from the mycelial to the parasitic yeast form. It is notable that the morphological transition is necessary for the pathogenicity of Paracoccidioides spp.. Thus, the objective of this study is to characterize the hybrid histidine kinase (HHK) protein and to evaluate its level of expression during the dimorphism of Paracoccidioides brasiliensis. We carried out similarity analyzes that indicated that HHK is highly conserved in other dimorphic fungi such as H. capsulatum and B. dermatitidis. In addition, a region of the HHK gene was cloned into pET32a expression vector and the recombinant protein was generated. After confirming the identity of HHK in UPLC-MSE, we produced polyclonal anti-histidine kinase antibodies. RT-qPCR revealed that PbHHK is expressed in greater amounts transition when compared to the other morphological phases. In conclusion, the high conservation of histidine kinase in dimorphic fungi combined with their increased expression in the transition phase demonstrates the importance of PbHHK for the morphological transition of P. brasiliensis.eng
dc.description.provenanceSubmitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2019-04-09T14:30:05Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Dener Lucas Araújo dos Santos - 2019.pdf: 2801543 bytes, checksum: a944a24bbe0ba174200238512c96030e (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5)eng
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dc.description.resumoOrganismos procarióticos e eucarióticos (exceto os pertencentes ao filo metazoa) desenvolveram um sistema chamado phosphorelay, que é responsável por adaptá-los a diferentes condições ambientais, como estresse oxidativo, osmótico e choque térmico. Estudos demonstraram que a inibição da histidina quinase híbrida, a proteína sensora do estímulo na via do phosphorelay, afetou a transição morfológica de fungos de micélio para a levedura. Dentre os fungos termodimórficos, o complexo Paracoccidioides estão entre os mais prevalentes na América Latina, principalmente no Brasil, como causadores da micose sistêmica paracoccidioidomicose (PCM). A exposição dos fungos desse complexo a temperatura corporal do hospedeiro (37 °C), leva a transição da forma miceliana para leveduriforme, que é sua forma parasitária. Neste sentido, é notável que a transição morfológica seja necessária para o patogenicidade de Paracoccidioides spp.. Assim, o objetivo deste estudo é caracterizar a proteína histidina quinase híbrida (HHK) e avaliar seu nível de expressão durante o dimorfismo de Paracoccidioides brasiliensis. Para isso, primeiramente foi realizado analises de similaridade que indicaram que a HHK é altamente conservada em outros fungos dimórficos tais como H. capsulatum e B. dermatitidis. Em seguida uma região do gene HHK foi clonado em vetor de expressão pET32a e as proteínas recombinantes foram geradas em condição otimizada. Após a confirmação da identidade da HHK em UPLC-MSE produzimos anticorpos policlonais anti- histidina quinase. A RT-qPCR revelou que PbHHK é mais expresso em transição quando comparado com as outras fases morfológicas. Em conclusão, a alta conservação da histidina quinase em fungos dimórficos combinado com sua expressão aumentada na fase de transição demonstram a importância de PbHHK para transição morfológica de P. brasiliensis.eng
dc.description.sponsorshipCoordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPESeng
dc.formatapplication/pdf*
dc.identifier.citationSANTOS, Dener Lucas Araújo dos. Caracterização molecular da proteína histidina quinase de Paracoccidioides brasiliensis. 2019. 51 f. Dissertação (Mestrado em Genética e Biologia Molecular) - Universidade Federal de Goiás, Goiânia, 2019.eng
dc.identifier.urihttp://repositorio.bc.ufg.br/tede/handle/tede/9457
dc.languageporeng
dc.publisherUniversidade Federal de Goiáseng
dc.publisher.countryBrasileng
dc.publisher.departmentInstituto de Ciências Biológicas - ICB (RG)eng
dc.publisher.initialsUFGeng
dc.publisher.programPrograma de Pós-graduação em Genética e Biologia Molecular (ICB)eng
dc.rightsAcesso Aberto
dc.rights.urihttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
dc.subjectParacoccidioides spp.por
dc.subjectHistidina quinasepor
dc.subjectExpressão heterólogapor
dc.subjectParacoccidioides spp.eng
dc.subjectHistidine kinaseeng
dc.subjectHeterologous expressioneng
dc.subject.cnpqGENETICA::GENETICA MOLECULAR E DE MICROORGANISMOSeng
dc.titleCaracterização molecular da proteína histidina quinase de Paracoccidioides brasiliensiseng
dc.title.alternativeMolecular characterization of the histidine kinase protein of Paracoccidioides brasiliensiseng
dc.typeDissertaçãoeng

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