Imunossensor impedimétrico para determinação de rituximabe aplicado ao controle qualidade e monitoramento clínico

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dc.contributor.advisor-co1Neves, Bruno Júnior
dc.contributor.advisor-co1Latteshttp://lattes.cnpq.br/7256565904920282pt_BR
dc.contributor.advisor1Gil, Eric de Souza
dc.contributor.advisor1Latteshttp://lattes.cnpq.br/3218622824233303pt_BR
dc.contributor.referee1Gil, Eric de Souza
dc.contributor.referee2Sgobbi, Lívia Flório
dc.contributor.referee3Feres, Valeria Christina De Rezende
dc.contributor.referee4Oliveira Neto, Jerônimo Raimundo de
dc.contributor.referee5Ferreira Júnior, Álvaro
dc.creatorRodrigues, Edson Silvio Batista
dc.creator.Latteshttp://lattes.cnpq.br/0626957028228867pt_BR
dc.date.accessioned2023-07-06T11:01:59Z
dc.date.available2023-07-06T11:01:59Z
dc.date.issued2023-02-10
dc.description.abstractIntroduction: Cancer is an umbrella term for a large group of diseases that can affect any part of the body. Rituximab (RTX) is a chimeric monoclonal antibody (mAb) formed by the mouse/human combination, which specifically binds to the CD20 cell marker that is expressed in normal and malignant B lymphocytes, exerting significant antitumor activity. In this context, RTX emerged as a therapeutic alternative in the treatment of various pathologies, including autoimmune diseases, inflammatory diseases and various types of cancer in which sensitive and low-cost methods are required for therapeutic drug monitoring (TDM) and quality control (QC) of this drug. Objectives: To develop a selective electrochemical immunosensor for the detection and quantification of RTX in urine and blood. Methodology: The ploliconal antibody (pAb) was purified from chicken egg, used as a biorecognition element to create an immunosensor for the detection and quantification of RTX. The immunosensor was constructed from the immobilization of the RTX IgY antibody on the glassy carbon electrode surfaces. The characterization of the immunosensor was obtained through monitoring at each stage via cyclic voltammetry and electrochemical impedance spectroscopy, where selectivity is obtained by specifically binding pAb and RTX and casein is used to block possible nonspecific interactions of other proteins. After the development of the immunosensor, the validation of the method was carried out, evaluating the selectivity, accuracy, precision, linearity and limits of detection (LOD) and quantification (LOQ). Finally, the RTX was determined in urine and blood samples. Results and discussion: Linearity was demonstrated between charge transfer resistance and RTX from 2 to 14 μg mL−1 (r2 of 0.99), with LOD and LOQ of 130 and 400 ng mL−1 respectively. The method showed adequate precision with a RPD of 0.96% for researcher 1 and 1.27% for researcher 2, and accuracy with a RPD of 1.30%, with a confidence interval between 99.0% and 101.0 %. Selectivity was achieved by demonstrating the binding specificity between the antibody and RTX, where casein blocks non-specific binding when the immunosensor is applied to blood and urine samples. Conclusion: The developed immunosensor presented precision and accuracy for the detection of RTX with results in approximately 20 minutes. In this way, low-cost, marker-sensitive electrochemical immunosensors can help in TDM, QC and extended stability monitoring of different drugs, in a simple way and with versatile assays.eng
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dc.description.resumoIntrodução: Câncer é um termo genérico para um grande grupo de doenças que pode afetar qualquer parte do corpo. O Rituximabe (RTX) é um anticorpo monoclonal (mAb) químerico formado pela combinação camundongo/humano, que se liga especificamente ao marcador da célula CD20 que é expresso em linfócitos B normais e malignos, exercendo atividade antitumoral significativa. Nesse contexo o RTX surgiu como alternativa terapêutica no tratamento de várias patologias, incluindo doenças autoimunes, doenças inflamatórias e diversos tipos de câncer no qual é necessário métodos sensíveis e de baixo custo para o monitoramento terapêutico de fármacos (TDM) e controle de qualidade (CQ) desse medicamento. Objetivo: Desenvolver um imunossensor eletroquímico seletivo para a detecção e quantificação de RTX na urina e sangue. Metodologia: O anticorpo ploliconal (pAb) foi purificado a partir de ovo de galinha, usado como elemento de bioreconhecimento para criar um imunossensor para a detecção e quantificação de RTX. O imunossensor foi construído apartir da imobilização do anticorpo IgY de RTX nas superfícies do eletrodo de carbono vítreo. A caracterização do imunossensor foi obtida atravez do monitoramento em cada etapa via voltametria cíclica e espectroscopia de impedância eletroquímica, onde a seletividade é obtida pela ligação especifica em o pAb e o RTX e a caseína é utilizada para bloquear possíveis interações inespecífica de outras protéinas. Após o desenvolvimento do imunossensor foi realizado a validação do método, avaliando a seletividade, exatidão, precisão, linearidade e os limites de detecção (LOD) e quantificação (LOQ). Por fim foi determinado o RTX em amostras de urina e sangue. Resultados e discussões: Foi demonstrado a linearidade entre a resistência de transferência de carga e RTX de 2 a 14 μg mL −1 (r2 de 0,99), com LOD e LOQ de 130 e 400 ng mL −1 respectivamente. O método apresentou precisão adequada com DPR de 0,96% para o pesquisador 1 e 1,27% para o pesquisador 2, e exatidão com DPR de 1,30%, com um intervalo de confiaça entre 99,0% a 101,0%. A seletividade foi alcançada demonstrando a especificidade da ligação entre o anticorpo e o RTX, onde a caseína bloqueia ligações inespecíficas quando o imunosensor é aplicado em amostras de sangue e urina. Conclusões: O imunossensor desenvolvido apresentou precisão e exatidão para a detecção de RTX com resultados em aproximadamente 20 minutos. Dessa forma imunossensores eletroquímicos de baixo custo, com marcadores e sensíveis podem auxiliar no TDM, CQ e monitoramento de estabilidade estendida de diferentes medicamentos, de maneira simples e com ensaios versáteis.pt_BR
dc.identifier.citationRODRIGUES, E. S. B. Imunossensor impedimétrico para determinação de rituximabe aplicado ao controle qualidade e monitoramento clínico. 2023. 58 f. Tese (Doutorado em Ciências Farmacêuticas) - Universidade Federal de Goiás, Goiânia, 2023.pt_BR
dc.identifier.urihttp://repositorio.bc.ufg.br/tede/handle/tede/12938
dc.languageporpt_BR
dc.publisherUniversidade Federal de Goiáspt_BR
dc.publisher.countryBrasilpt_BR
dc.publisher.departmentFaculdade de Farmácia - FF (RMG)pt_BR
dc.publisher.initialsUFGpt_BR
dc.publisher.programPrograma de Pós-graduação em Ciências Farmacêuticas (FF)pt_BR
dc.rightsAttribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 International*
dc.rights.urihttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/*
dc.subjectImunoensaiopor
dc.subjectProteína CD20por
dc.subjectEspectroscopia de impedância eletroquímicapor
dc.subjectMonitoramento terapêutico de fármacospor
dc.subjectTestes on-sitepor
dc.subjectImmunoassayeng
dc.subjectCD20 proteineng
dc.subjectElectrochemical impedance spectroscopyeng
dc.subjectTherapeutic drug monitoringeng
dc.subjectOn-site testingeng
dc.subject.cnpqCIENCIAS DA SAUDE::FARMACIA::FARMACOTECNIApt_BR
dc.titleImunossensor impedimétrico para determinação de rituximabe aplicado ao controle qualidade e monitoramento clínicopt_BR
dc.title.alternativeImpedimetric immunosensor for rituximab innocence applied to quality control and clinical monitoringeng
dc.typeTesept_BR

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