Expressão heterológa e imunolocalização das proteínas HSP30 e catalase peroxissomal identificadas na parede de Paracoccidioides spp. interagindo com macrófagos

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dc.contributor.advisor-co1Tomazett, Mariana Vieira
dc.contributor.advisor-co1Latteshttp://lattes.cnpq.br/1754626527596461eng
dc.contributor.advisor1Soares, Célia Maria de Almeida
dc.contributor.advisor1Latteshttp://lattes.cnpq.br/8539946335852637eng
dc.contributor.referee1Dias, Fátima Ribeiro
dc.contributor.referee2Paccez, Juliano Domiraci
dc.contributor.referee3Soares, Célia Maria de Almeida
dc.creatorPereira, Christie Ataides
dc.creator.Latteshttp://lattes.cnpq.br/7938638213946544eng
dc.date.accessioned2019-02-11T10:24:46Z
dc.date.issued2018-03-09
dc.description.abstractThe genus Paracoccidioides comprises thermodymorphic ascomycete’s fungi, causative agents of Paracoccidioidomycosis (PCM). PCM is an endemic granulomatous systemic mycosis in Latin America. The pathogen ability to interact and adhere to host surface structures is critical to the colonization, invasion, growth, and hematogenous spread of the fungus to tissues. Fungi use a variety of surface molecules to bind to the components of the host's extracellular matrix and defense cells, such as macrophages, so they can survive in these environments. A total of 94 cell wall proteins of Paracoccidioides spp. interacting with macrophages were identified through mass spectrometry studies. In this sense it becomes important the production of those possible adhesins via heterologous expression and localization of these proteins, aiming to perform adhesion studies. Therefore, HSP30 and peroxisomal catalase proteins of Paracoccidioides brasiliensis were expressed in a bacterial heterologous system, Escherichia coli. Open reading frames (ORFs) of the genes encoding HSP30 and peroxisomal catalase were cloned into pGEX-4T3 expression vector and the respective clones were used in the transformation of E. coli pLySs cells. The recombinant proteins were used in the production of polyclonal antibodies in mice. Anti-HSP30 and anti-CatP polyclonal antibodies were used in immunofluorescence assays, to obtain confirmation of the cellular location of HSP30 and CatP proteins. The obtained data allowed the localization of those proteins in the cell wall of the fungi cells, corroborating with the proteomic analyzes. The aim of this work is to perform additional macrophage interaction experiments to evaluate the potential of both proteins as adhesins.eng
dc.description.provenanceSubmitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2019-02-11T10:19:53Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Christie Ataides Pereira - 2018.pdf: 2029195 bytes, checksum: b9fbd3f81e3957f4e060b51e3f5c3392 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5)eng
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dc.description.resumoO gênero Paracoccidioides compreende fungos ascomicetos termodimórficos, que causam a doença Paracoccidioidomicose (PCM). A PCM é uma micose sistêmica granulomatosa e endêmica na América Latina. A capacidade do patógeno de interagir e aderir à matriz extracelular do hospedeiro é fundamental para a colonização, invasão, crescimento e disseminação hematogênica do fungo para tecidos. Os fungos utilizam uma variedade de moléculas de superfície para se aderirem à componentes da matriz extracelular do hospedeiro e células de defesa, como macrófagos, podendo assim sobreviver nesses ambientes. Foi identificado por meio de estudos de espectrometria de massa, um total de 94 proteínas da parede celular de Paracoccidioides spp. interagindo com macrófagos. Nesse sentido torna-se importante a produção dessas possíveis adesinas via expressão heteróloga e localização dessas proteínas, visando estudos posteriores de adesão. Neste estudo, foram expressas as proteínas HSP30 e catalase peroxissomal de Paracoccidioides brasiliensis em sistema heterólogo bacteriano, Escherichia coli. Os quadros abertos de leitura (ORFs) dos genes codificadores de HSP30 e catalase peroxissomal foram clonados em vetor de expressão pGEX-4T3 e os respectivos clones foram utilizados na transformação de células de E. coli pLySs. As proteínas recombinantes resultantes foram utilizadas na produção de anticorpos policlonais,em camundongos. Os anticorpos policlonais anti-HSP30 e anti-CatP foram utilizados em ensaios de imunofluorescência para confirmação da localização celular das proteínas HSP30 e CatP. Com os resultados pode-se observar que as proteínas estão localizadas na parede celular do fungo corroborando assim com os dados de análises proteômicas previamente publicados. A perspectiva deste trabalho é realizar experimentos adicionais de interação com macrófagos para avaliar o potencial de ambas as proteínas como adesinas.eng
dc.description.sponsorshipCoordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPESeng
dc.formatapplication/pdf*
dc.identifier.citationPEREIRA, C. A. Expressão heterológa e imunolocalização das proteínas HSP30 e catalase peroxissomal identificadas na parede de Paracoccidioides spp. interagindo com macrófagos. 2018. 67 f. Dissertação (Mestrado em Genética e Biologia Molecular) - Universidade Federal de Goiás, Goiânia, 2018.eng
dc.identifier.urihttp://repositorio.bc.ufg.br/tede/handle/tede/9281
dc.languageporeng
dc.publisherUniversidade Federal de Goiáseng
dc.publisher.countryBrasileng
dc.publisher.departmentInstituto de Ciências Biológicas - ICB (RG)eng
dc.publisher.initialsUFGeng
dc.publisher.programPrograma de Pós-graduação em Genética e Biologia Molecular (ICB)eng
dc.rightsAcesso Aberto
dc.rights.urihttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
dc.subjectAdesinaspor
dc.subjectCatalase peroxissomalpor
dc.subjectParacoccidioidespor
dc.subjectHSP30por
dc.subjectAdhesinseng
dc.subjectHSP30eng
dc.subjectPeroxisomal catalaseeng
dc.subjectParacoccidioideseng
dc.subject.cnpqBIOQUIMICA::BIOLOGIA MOLECULAReng
dc.thumbnail.urlhttp://repositorio.bc.ufg.br/tede/retrieve/52346/Disserta%c3%a7%c3%a3o%20-%20Christie%20Ataides%20Pereira%20-%202018.pdf.jpg*
dc.titleExpressão heterológa e imunolocalização das proteínas HSP30 e catalase peroxissomal identificadas na parede de Paracoccidioides spp. interagindo com macrófagoseng
dc.title.alternativeHeterologous expression and immunolocalization of HSP30 and peroxisomal catalase proteins in the wall of Paracoccidioides spp. interacting with macrophageseng
dc.typeDissertaçãoeng

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