Caracterização Molecular Do Plasmídeo pLK39 Extraído De Uma Bactéria Endofítica Isolada De Solanum Lycocarpum

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dc.contributor.advisor1BATAUS, Luiz Artur Mendes
dc.contributor.advisor1Latteshttp://lattes.cnpq.br/5637230378599476por
dc.creatorOLIVEIRA, Vera Lúcia Cardoso de
dc.creator.Latteshttp://lattes.cnpq.br/0165152523587837por
dc.date.accessioned2014-07-29T15:16:36Z
dc.date.available2010-05-31
dc.date.issued2002-02-28
dc.description.abstractThe characterization of the plasmid pLK39.was the aim of work.pLK39 was isolated from a endophytic Gram-negative, bactéria isolated from leaves form Solanum lycocarpum (Lobeira). In order to obtain a selection marker which would characterization in Escherichia coli the kanamycin, resistence gene from pUC4K. was subcloned into the PstIsite of pLK39. The characterization of PLK39 was basedon studies of stability, incompatibility, determination of the copy number and through DNA sequencing. The stability was carried out in Escherichia coli XL10 cells. Cells transformed with pLK39 were inoculated in Lúria broth containing Kanamycin (50μg/ml) during24 hours. After 24 hours of incubation one sample of the culture was in medim with and without selective pressure, and inoculated in Lúria broth without pressure médium, for 240 generations. After 240 generations 81,5% of cells maintained the plasmid, showing that pLK39is highly stable in Escherichia coli to make the incompatibility test, cells of Escherichia coli XL10 were co-transformed with pLK39/pUC18; pBR322 and pLK39/pACYC184. After 240 generations, the plasmid pLK39 iof detected in all systems used, showing the compatibility of pLK39 with the plasmids tested. The copý number pLK39 was estimated by the intensity of plasmidial bands in agarose gel, electrophoresis using a photodocumentation and analysis system (KODAK EDAS). The copý number of pLK39 was estimated as 25 copies per cell. PLK39 was digested with Sau3AI restriction and subcloned into the BamHI site of plasmid pUC18. The recombinant clones were sequenced and 1637 pb reading fragment was obtained. This sequence showed high homology with pSW200, pSW100, pEC3, pUCD5000 and pBERT, which were isolated from Gram-negative bacteria. This sequence possesses two possible genes. The ORF I showed high homology with mobB gene from plasmid pSW200 (96%), pSW100 (96%), pEC3 (94%), pUCD5000 (94%) and pBERT (87%). The ORF II showed homology with mobD gene from plasmids pSW200 (92%), pSW100 (90%), pEC3 (90%) and PUCD5000 (89%).eng
dc.description.provenanceMade available in DSpace on 2014-07-29T15:16:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 vera.pdf: 2531477 bytes, checksum: 5a02810a0fd91027af8891fb7a147973 (MD5) Previous issue date: 2002-02-28eng
dc.description.resumoO objetivo deste trabalho foi caracterizar o plasmídeo pLK39. Este plasmídeo foi extraído de uma bactéria endofítica Gram-negativa, isolada da folha de Solanum Lycocarpum (Lobeira). Este plasmídeo apresenta um tamanho de aproximadamente 4,5 kb. Visando obter uma marca de seleção para permitir sua caracterização em células de Escherichia coli, foi introduzido o gene de resistência à Kanamicina, extraído do plasmídeo pUC4K. A caracterização do pLK39 foi realizada através de estudos de estabilidade, incompatibilidade, estimativa do número de cópias e através de seqüenciamento de parte do plasmídeo. A estabilidade foi testada em células de Escherichia coli XL10. Células transformadas com pLK39 foram cultivadas em meio Lúria suplementado com Kanamicina (50 μg/mL) durante 24 horas uma amostra da cultura era plaqueada em meio seletivo e em meio sem pressão seletiva parte dessa amostra foi inoculada em meio Lúria sem pressão seletiva e incubado por 24 até atingir 240 gerações. Após 240 gerações 81.5% das células mantiveram o plasmídeo, mostrando que o pLK39 é bastante estável em células de Escherichia coli. Para realização do teste de incompatibilidade, células de Escherichia coli XL10 foram co-transformadas com os plasmídeos pLK39/pUC18, pLK39/pBR322 e pLK39/pACYC184. Após 240 gerações, foi detectada a presença do plasmídeo pLK39 em todos os sistemas testados, demonstrando a compatibilidade do pLK39 com os plasmídeos testados. O número de cópias do pLK39 foi estimado através da comparação da intensidade das bandas plasmidiais, obtidas através de eletroforese em gel de agarose, realizada a partir de uma extração de plasmídeos de células de Escherichia coli XL10 transformadas com pUC18, pBR322 e pLK39. A quantificação de cada banda foi realizada utilizando o sistema de fotodocumentação e analise (KODAK EDAS). O número de cópias do pLK39 foi estimado em 25 cópias por células. O plasmídeo pLK39 foi digerido com enzima de restrição Sau3AI e sub-clonado no sítio de BamHI do plasmídeo pUC18. Os clones recombinantes foram seqüenciados. Foi obtido um fragmento com 1.637 pb. Essa seqüência apresentou uma grande homologia com os plasmídeos pSW200, pSW100, pEC3, pUCD5000 e pBERT, os quais foram isolados de diferentes bactérias Gram-negativas. A seqüência apresentou dois possíveis genes. A ORF I apresentou grande homologia com o gene mobB dos plasmídeos pSW200 (96%), pSW100 (96%), pEC3 (94%), pUCD5000 (94%) e pBERT (87%). A ORF II apresentou homologia com o gene mobD dos plasmídeos pSW200 (92%), pSW100 (90%), pEC3 (90%) e PUCD5000 (89%).por
dc.formatapplication/pdfpor
dc.identifier.citationOLIVEIRA, Vera Lúcia Cardoso de. Molecular Characterization of Plasmid pLK39 Extracted From A Endophytic Bacteria Isolated From Wolf Apple. 2002. 69 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Biolóicas) - Universidade Federal de Goiás, Goiânia, 2002.por
dc.identifier.urihttp://repositorio.bc.ufg.br/tede/handle/tde/1287
dc.languageporpor
dc.publisherUniversidade Federal de Goiáspor
dc.publisher.countryBRpor
dc.publisher.departmentCiências Biolóicaspor
dc.publisher.initialsUFGpor
dc.publisher.programMestrado em Biologiapor
dc.rightsAcesso Abertopor
dc.subjectBactériapor
dc.subjectEndofíticopor
dc.subjectDNApor
dc.subjectPlasmídeopor
dc.subjectBactériaeng
dc.subjectEndophyticeng
dc.subjectDNAeng
dc.subjectPlasmideng
dc.subject1.Microorganismos Endofíticos 2.Plasmídeos 3.Plasmídeo pLK39por
dc.subject.cnpqCNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::BIOQUIMICApor
dc.thumbnail.urlhttp://repositorio.bc.ufg.br/TEDE/retrieve/4034/vera.pdf.jpg*
dc.titleCaracterização Molecular Do Plasmídeo pLK39 Extraído De Uma Bactéria Endofítica Isolada De Solanum Lycocarpumpor
dc.title.alternativeMolecular Characterization of Plasmid pLK39 Extracted From A Endophytic Bacteria Isolated From Wolf Appleeng
dc.typeDissertaçãopor

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