Estudo da atividade vasorrelaxante da fração butanólica das folhas de caryocar brasiliense camb. e do ácido gálico em aorta torácica de ratos
| dc.contributor.advisor-co1 | Filgueira, Fernando Paranaíba | |
| dc.contributor.advisor1 | Ghedini, Paulo César | |
| dc.creator | Oliveira, Lais Moraes de | |
| dc.date.accessioned | 2025-03-10T21:02:21Z | |
| dc.date.available | 2025-03-10T21:02:21Z | |
| dc.date.issued | 2015 | |
| dc.description.abstract | Caryocar brasiliense Camb., known as pequi, is a typical Brazilian Cerrado tree. Previous study showed that butanolic fraction (BF) of pequi leaves presents endothelium dependent vasorelaxant effect in rat aortic preparations by stimulation of the nitric oxide/guanylyl cyclase (NO/sGC) pathway. In addition, the preliminar chemistry characterization of BF showed the presence of the quercetin and gallic acid phenolic compounds. Considering these informations, the presente study was performed with the aim to identify the mechanisms involved in the activation of NO/sGC pathway by BF and to those involved in the vasorelaxant effect of gallic acid (GA), that it is a compound of BF. The action mechanisms were evaluated on the BF and GA vascular reactivity in the presence of protein agonists and antagonists in isolated preparations of rat thoracic aorta rings. The results of the vascular reactivity were confirmed with the Western blotting technique. In addition, the chemistry characterization of BF was determined with the high-resolution mass spectrometry. The BF promoted vasorelaxant effect in rat thoracic aorta rings in a concentration- dependent manner in preparations with vascular endothelium, which was decreased in the presence of Ca2+/CaM complex inhibitor (calmidazolium) and Pl3-kinase inhibitor (wortmannin). However, the incubation of aortic preparations with KN-93 (Ca2+/CaM dependent protein kinase II inhibitor) and PP2 (Src kinase inhibitor) did not inhibit the vasorelaxation induced by BF. Western blotting tests confirmed that BF caused phosphorylation of eNOS in the Ser1177 residue, effect mediated by the Pl3- kinase/Akt pathway. The chemistry characterization of BF identified the presence of 72 compounds, and the most of them are phenolic compounds and its derivatives. The GA promoted vasorelaxant effect in a concentration-dependent manner in the higher concentrations (0.4-10 mM). The aortic relaxation induced by GA was not abolished by removal of the vascular endothelium. The incubation with the nitric oxide synthase inhibitor (L-NAME), a guanylate cyclase inhibitor (ODQ), or the Ca2+/CaM complex inhibitor (calmidazolium), non-specific potassium channel blocker (TEA), or the blocker voltage-dependent potassium channel (4-aminopyridine) and with the potassium channel blocker type rectifiers (barium chloride) significantly reduced the GA pEC50 values. In addition, GA caused phosphorylation of eNOS in the Ser1177 residue. The results showed that prostanoids vasodilators, Pl3-kinase, Src-Kinase and calcium dependent and sensitive ATP potassium channels are not involved in the vasorelaxant effect promoted by the GA. The incubation with GA promoted reduction of CaCl2-induced contractions and blocked BAY K8644-induced vascular contractions, but it did not inhibit the contraction induced by the release of Ca2+ from the sarcoplasmatic reticulum stores. The results here obtained showed that vasorelaxant effect promoted by FB in aortic rats is due to the phosphorylation of eNOS by Pl3-kinase/Akt pathway and that this effect is caused by the phenolic compounds of BF. On the other hand, the vasorelaxant effect of GA involves endothelium-dependent and -independent mechanisms, as the phosphorylation of eNOS at Ser1177 position and the inhibition of the calcium influx via L-type Ca2+ channels. Taken together, these results help us to understand the action mechanisms involved in the endothelium dependent vasorelaxant effect of BF and for to elucidate the possible compounds associated with this effect. In another way, this study contributes for a better knowledge of the action mechanisms associated with the GA vasorelaxant effect. | eng |
| dc.description.resumo | Caryocar brasiliense Camb., conhecida popularmente como pequi, é uma planta típica da região do Cerrado Brasileiro. Estudo anterior do grupo demonstrou que a fração butanólica (FB) das folhas de pequi apresenta efeito vasorrelaxante dependente do endotélio em aorta torácica de ratos envolvendo a via óxido nítrico/guanilato ciclase (NO/GCs), sendo que os mecanismos responsáveis pela ativação desta via não foram determinados. Além disso, a caracterização química preliminar da FB mostrou a presença dos compostos fenólicos como quercetina e ácido gálico (AG). Considerando essas informações, o presente estudo buscou determinar os mecanismos celulares que levam à ativação da via NO/GCs pela FB e também aqueles envolvidos na ação vasorrelaxante promovido pelo composto presente na FB, o AG. Para elucidar esses mecanismos, foram utilizados testes de reatividade vascular com FB e com AG na presença de agonistas e antagonistas farmacológicos, em preparações isoladas de anéis de aorta torácica de ratos, sendo os resultados confirmados posteriormente pela técnica de Western blotting. Adicionalmente, foi realizada a caracterização química da fração butanólica por espectrometria de massas de alta resolução. A FB promoveu efeito vasorrelaxante em anéis de aorta torácica de ratos de maneira dependente de concentração em preparações com endotélio vascular, efeito que foi significativamente reduzido na presença do inibidor do complexo Ca2+/CaM (calmidazólio) e do inibidor da Pl3- quinase (wortmannin). A incubação das preparações aórticas com KN-93 (inibidor da proteína quinase II dependente da calmodulina) e PP2 (inibidor da Src quinase) não inibiram o vasorrelaxamento induzido pela FB. Testes de Western blot confirmaram que a FB promove a fosforilação da eNOS no resíduo de Ser1177, efeito mediado através da via Pl3-quinase/Akt. Os testes de caracterização química da FB identificaram a presença de 72 compostos, sendo na sua maioria compostos fenólicos e seus derivados. O AG, por sua vez, promoveu efeito vasorrelaxante de modo concentração-dependente em concentrações mais elevadas (0,4–10 mM). O relaxamento aórtico induzido pelo AG não foi abolido pela remoção do endotélio vascular. A incubação prévia com o inibidor da sintase de óxido nítrico (L-NAME), inibidor da guanilato ciclase (ODQ), inibidor do complexo Ca2+/CaM (calmidazólio), bloqueador de canal de potássio inespecífico (TEA), bloqueador de canal de potássio voltagem dependente (4-aminopiridina) e bloqueador de canal de potássio do tipo retificadores (cloreto de bário) reduziram significativamente os valores de pEC50 (logaritmo negativo da EC50 - concentração necessária para alcançar 50% da resposta máxima). Além disso, o AG promoveu a fosforilação da eNOS no resíduo Ser1177 . Os resultados mostraram que prostanóides vasodilatadores, Pl3-quinase, Src quinase e canais de potássio cálcio-dependentes e sensíveis ao ATP não estão envolvidos no mecanismo de ação vasorrelaxante promovido pelo AG. A incubação prévia com AG promoveu diminuição da resposta vasoconstritora ao CaCl2 e ao ativador de canal de cálcio do tipo-L, porém não alterou a mobilização de cálcio do retículo sarcoplasmático. Os resultados obtidos demonstraram que o efeito vasorrelaxante induzido pela FB em aorta de ratos ocorre através da fosforilação da eNOS via Pl3-quinase/Akt e que este efeito é possivelmente promovido por compostos fenólicos presente na fração. No que concerne ao AG, o mesmo possui efeito vasorrelaxante dependente e independente do endotélio, envolvendo a fosforilação da eNOS no resíduo Ser1177 e a inibição do influxo de cálcio via canais de cálcio do tipo L. O conjunto dos dados obtidos contribuem para a compreensão dos mecanismos de ação envolvidos no efeito vasorrelaxante dependente do endotélio promovido pela FB e para a elucidação dos compostos que podem estar associados ao efeito. Além disso, este estudo contribui para o entendimento dos mecanismos de ação envolvidos no efeito vasorrelaxante do ácido gálico. | |
| dc.identifier.citation | OLIVEIRA, Lais Moraes de. Estudo da atividade vasorrelaxante da fração butanólica das folhas de caryocar brasiliense camb. e do ácido gálico em aorta torácica de ratos. Orientador: Paulo César Ghedini. 2015. 109 f. Tese (Doutorado em Ciências Biológicas), Instituto de Ciências Biológicas, Universidade Federal de Goiás, Goiânia, 2015. | |
| dc.identifier.uri | http://repositorio.bc.ufg.br/tede/handle/tede/13920 | |
| dc.language | por | |
| dc.publisher | Universidade Federal de Goiás | |
| dc.publisher.country | Brasil | |
| dc.publisher.department | Instituto de Ciências Biológicas - ICB (RMG) | |
| dc.publisher.initials | UFG | |
| dc.publisher.program | Programa de Pós-graduação em Ciências Biológicas (ICB) | |
| dc.rights | Acesso Embargado | |
| dc.subject | Caryocar brasiliense Camb. | por |
| dc.subject | Fração butanólica | por |
| dc.subject | Ácido gálico | por |
| dc.subject | Vasorrelaxante | por |
| dc.subject | Óxido nítrico | por |
| dc.subject | Aorta torácica | por |
| dc.subject | Butanolic fraction | eng |
| dc.subject | Gallic acid | eng |
| dc.subject | Vasorelaxant | eng |
| dc.subject | Nitric oxide | eng |
| dc.subject | Thoracic aorta | eng |
| dc.subject.cnpq | CIENCIAS BIOLOGICAS::FARMACOLOGIA | |
| dc.subject.cnpq | CIENCIAS BIOLOGICAS::FISIOLOGIA | |
| dc.title | Estudo da atividade vasorrelaxante da fração butanólica das folhas de caryocar brasiliense camb. e do ácido gálico em aorta torácica de ratos | |
| dc.type | Tese |