Identificação proteômica, expressão heteróloga, citolocalização, estudos de regulação transcricional e traducional da Aconitase Mitocondrial de Paracoccidioides brasiliensis

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dc.contributor.advisor1SOARES, Célia Maria de Almeida
dc.contributor.advisor1Latteshttp://lattes.cnpq.br/8539946335852637por
dc.creatorBRITO, Wesley de Almeida
dc.creator.Latteshttp://lattes.cnpq.br/0958677185311955por
dc.date.accessioned2014-07-29T15:10:33Z
dc.date.available2010-08-25
dc.date.issued2009-11-18
dc.description.abstractParacoccidioides brasiliensis is a thermal-dimorphic fungus, the causative agent of Paracoccidioidomycosis (PCM), an important endemic mycosis in Latin America. A protein species preferentially expressed in yeast cells with a molecular mass of 80kDa and isoeletric point (pI) of 7.79 was isolated from the proteome of P. brasiliensis and characterized as an aconitase (E.C. 4.2.1.3). Aconitase is an enzyme that catalyzes the isomerization of citrate to isocitrate in both the Krebs cycle (KC) and the glyoxylate cycle (GC). We report the cloning and characterization of the cDNA encoding the aconitase of P. brasiliensis (PbACO). The cDNA showed a 2337 bp open reading frame (ORF) and encoded a predicted protein with 779 amino acids. A polyclonal antibody against the purified recombinant PbACO was obtained in order to analyze the subcellular localization of the molecule in P. brasiliensis. The protein is present in the extracellular fluid, cell wall, mitochondria, cytosol and peroxisomes of yeast cells as demonstrated by western blot and immunocytochemistry analysis. The expression analysis of the Pbaco gene was performed through quantitative real time RT-PCR and results demonstrated increasing expression during differentiation from mycelium to yeast cells. Real time RT-PCR assays was also used to evaluate the Pbaco expression when the fungus grows on media with acetate and ethanol as sole carbon sources and in different iron levels. The results demonstrated that Pbaco transcript is over expressed in acetate and ethanol as sole carbon sources and in highiron conditions.eng
dc.description.provenanceMade available in DSpace on 2014-07-29T15:10:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese Wesley de Almeida Brito.pdf: 6161747 bytes, checksum: 6249a08f73180f831c2df168246efa67 (MD5) Previous issue date: 2009-11-18eng
dc.description.resumoParacoccidioides brasiliensis é um fungo termodimórfico, agente causador de uma importante micose sistêmica na América Latina, a paracoccidioidomicose (PCM). Uma proteína apresentando massa molecular de 80kDa e ponto isoelétrico (pI) de 7,79, preferencialmente expressa em células leveduriformes, foi isolada do proteoma de P. brasiliensis e caracterizada como uma aconitase (EC 4.2.1.3). Aconitase é uma enzima que catalisa a isomerização do citrato em isocitrato tanto no ciclo de Krebs (CK) quanto no ciclo glioxalato (CG). No presente estudo reportamos a clonagem e caracterização do cDNA da aconitase de P. brasiliensis (PbACO). O cDNA apresentou um quadro aberto de leitura (ORF) com 2337 pares de bases, codificando uma predita proteína com 779 resíduos de aminoácidos. Objetivando a localização da aconitase de P. brasiliensis foi produzida e purificada uma proteína recombinante a qual foi utilizada para a produção de um anticorpo policlonal anti-PbACO. A proteína foi localizada no fluído extracelular, parede celular, mitocôndria, citosol e nos peroxissomos de células leveduriformes, como demonstrado por ensaios de Western blotting e por imunocitoquímica. A análise da expressão do gene Pbaco foi realizada através RT-PCR em tempo real e os resultados demonstraram um aumento da expressão durante a diferenciação celular de micélio para levedura. A expressão Pbaco também foi avaliada quando o fungo é cultivado em meios de cultura contendo acetato e etanol como única fonte de carbono bem como em diferentes concentrações de ferro. Os resultados demonstraram que o transcrito de Pbaco é mais expresso em acetato e etanol como única fonte de carbono e em altas concentrações de ferro.por
dc.formatapplication/pdfpor
dc.identifier.citationBRITO, Wesley de Almeida. Identification,characterization and regulation studies of the mitochondrial Aconitase of Paracoccidioides brasiliensis. 2009. 108 f. Tese (Doutorado em Ciencias Biologicas) - Universidade Federal de Goiás, Goiânia, 2009.por
dc.identifier.urihttp://repositorio.bc.ufg.br/tede/handle/tde/1018
dc.languageporpor
dc.publisherUniversidade Federal de Goiáspor
dc.publisher.countryBRpor
dc.publisher.departmentCiencias Biologicaspor
dc.publisher.initialsUFGpor
dc.publisher.programDoutorado em Biologiapor
dc.rightsAcesso Abertopor
dc.subject1. Paracoccidioides brasiliensispor
dc.subject2. Aconitasepor
dc.subject3. Proteômicapor
dc.subject1. Paracoccidioides brasiliensiseng
dc.subject2. Aconitaseeng
dc.subject3. Mass spectrometryeng
dc.subject4. Cellular localization 5. Carbon sourceseng
dc.subject1. Paracoccidioides brasiliensis; 2. Aconitase; 3.Proteômicapor
dc.subject.cnpqCNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::BIOQUIMICA::BIOLOGIA MOLECULARpor
dc.thumbnail.urlhttp://repositorio.bc.ufg.br/TEDE/retrieve/3740/Tese%20Wesley%20de%20Almeida%20Brito.pdf.jpg*
dc.titleIdentificação proteômica, expressão heteróloga, citolocalização, estudos de regulação transcricional e traducional da Aconitase Mitocondrial de Paracoccidioides brasiliensispor
dc.title.alternativeIdentification,characterization and regulation studies of the mitochondrial Aconitase of Paracoccidioides brasiliensiseng
dc.typeTesepor

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