Análises in vivo e in vitro de interações intermoleculares da Beta-1,3- glicanosiltransferase 1 de Paracoccidioides brasiliensis

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dc.contributor.advisor1SOARES, Célia Maria de Almeida
dc.contributor.advisor1Latteshttp://lattes.cnpq.br/8539946335852637por
dc.creatorBAILÃO, Elisa Flávia Luiz Cardoso
dc.creator.Latteshttp://lattes.cnpq.br/7291301552786046por
dc.date.accessioned2014-07-29T15:16:35Z
dc.date.available2010-05-03
dc.date.issued2010-01-28
dc.description.abstractThe cell wall of pathogenic microbes acts as an initial barrier that is in contact with hostile environments. Besides functioning as a mechanical barrier, it harbours an immunogenic macromolecules arsenal. One of the ways that proteins can be associated to the cell wall, it is through GPI anchor. The hydrophobic C-terminal end of the β-1,3-glucanosyltransferase enzyme of the human pathogenic fungus Paracoccidioides brasiliensis is characteristic of GPI anchored proteins. The β-1,3-glucan assembling and rearrangement are essential since this molecule acts as a scaffold to support cell wall proteins and polysaccharides. In the thermodimorphic fungus P. brasiliensis, β-1,3-glucan is found predominantly in mycelium form and α-1,3-glucan is predominant in the yeast form. In this work, it was screened possible protein-protein interactions performed by β-1,3-glucanosyltransferase 1 of P. brasiliensis (PbGel1p). To obtain these results, a P. brasiliensis cDNA library was screened with PbGel1p using the Saccharomyces cerevisiae two hybrid system. In addition, pull-down assay was used as an in vitro complementary technique to isolate proteins that interact direct or indirectly with PbGel1p. It was screened 38 gene products using two hybrid system and it was identified 3 proteins using the pull-down assay associated with mass spectrometry. The PbGel1p role in the cell wall maintenance and remodeling was indicated through the analysis of screened interactions, like alpha-glucosides permease, acid phosphatase, GDSL lipase, septin, actin, tubulin, HSP90 and pyruvate kinase. Furthermore, nuclear localization of PbGel1p and its role in the locus-specific transcriptional silencing were suggested based on such interactions: Qde2 argonaute, transcription elongation factor spt6, others transcription factors and ATP-citrate synthase. Therefore, this study indicated, for the first time, that PbGel1p has multiple location and it participates either in roles classically described for glucanosyltransferases, as the cell wall remodeling, or in recently described functions for this family of proteins, as the locus-specific transcriptional silencing.eng
dc.description.provenanceMade available in DSpace on 2014-07-29T15:16:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao FINAL_EF_corrigida_BC-UFG.pdf: 1485117 bytes, checksum: ecdc9729cc08da2832a6566c39052f65 (MD5) Previous issue date: 2010-01-28eng
dc.description.resumoA parede celular de microrganismos patogênicos atua como uma barreira inicial no contato entre o parasito e o hospedeiro. Além de funcionar como uma barreira mecânica, ela abriga um arsenal de macromoléculas imunogênicas. Uma forma pela qual as proteínas estão associadas à parede celular é por meio de âncoras-GPI. A extremidade carboxila hidrofóbica da enzima β-1,3-glicanosiltransferase do fungo patogênico humano Paracoccidioides brasiliensis é característica de proteínas GPI-ancoradas. A montagem e o rearranjo de β-1,3- glicana são de fundamental importância porque esta molécula serve como um esqueleto sobre o qual outros polissacarídeos e proteínas da parede celular estão associados. No fungo termodimórfico P. brasiliensis, β-1,3-glicana é encontrada prioritariamente em micélio, sendo α-1,3-glicana predominante em levedura. Foram rastreadas neste trabalho possíveis interações proteína-proteína realizadas pela β-1,3-glicanosiltransferase 1 de P. brasiliensis (PbGel1p). Para isso utilizou-se a técnica de duplo-híbrido em Saccharomyces cerevisiae, rastreando-se uma biblioteca de cDNA do fungo P. brasiliensis com a enzima estudada. Adicionalmente, foi utilizado, como técnica complementar, o ensaio de pull-down, que isolou in vitro proteínas que interagem direta ou indiretamente com a PbGel1p. Foi possível rastrear 38 produtos gênicos através do sistema de duplo híbrido e isolar três proteínas pelo ensaio de pull-down, identificadas por espectrometria de massas. O papel da PbGel1p na manutenção e no remodelamento da parede celular do fungo foi indicado através da análise das interações rastreadas, como permease de α-glicosídeos, fosfatase ácida, lipase da família GDSL, septina, actina, tubulina, HSP90 e piruvato quinase. Além disso, foram sugeridos a localização da PbGel1p no núcleo das células do fungo e seu papel no silenciamento gênico mediado por alterações estruturais, por meio do rastreamento das seguintes proteínas ligantes a PbGel1p: argonauta Qde2, fator de alongamento transcricional spt6, outros fatores transcricionais e ATP-citrato sintase. Portanto, este estudo indicou, pela primeira vez, que PbGel1p tem localização múltipla e participa tanto de funções classicamente descritas para glicanosiltransferases, como o remodelamento da parede celular, quanto de funções recentemente descritas para essa família de proteínas, como o silenciamento transcricional sítio-específico.por
dc.formatapplication/pdfpor
dc.identifier.citationBAILÃO, Elisa Flávia Luiz Cardoso. In vivo and in vitro analysis of Paracoccidioides brasiliensis Beta-1,3-glucanosyltransferase 1 intermolecular interactions. 2010. 107 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Biolóicas) - Universidade Federal de Goiás, Goiânia, 2010.por
dc.identifier.urihttp://repositorio.bc.ufg.br/tede/handle/tde/1282
dc.languageporpor
dc.publisherUniversidade Federal de Goiáspor
dc.publisher.countryBRpor
dc.publisher.departmentCiências Biolóicaspor
dc.publisher.initialsUFGpor
dc.publisher.programMestrado em Biologiapor
dc.rightsAcesso Abertopor
dc.subjectGlicanosiltransferase, duplo híbrido e pull-downpor
dc.subjectGlucanosyltransferase, two hybrid and pull-downeng
dc.subject.cnpqCNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::BIOQUIMICA::BIOLOGIA MOLECULARpor
dc.thumbnail.urlhttp://repositorio.bc.ufg.br/TEDE/retrieve/3998/Dissertacao%20FINAL_EF_corrigida_BC-UFG.pdf.jpg*
dc.titleAnálises in vivo e in vitro de interações intermoleculares da Beta-1,3- glicanosiltransferase 1 de Paracoccidioides brasiliensispor
dc.title.alternativeIn vivo and in vitro analysis of Paracoccidioides brasiliensis Beta-1,3-glucanosyltransferase 1 intermolecular interactionseng
dc.typeDissertaçãopor

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