Teste molecular com dupla estratégia de detecção para o diagnóstico diferencial de SARS-CoV-2 e Influenza A por RT-LAMP no ponto de atendimento

dc.contributor.advisor1Duarte, Gabriela Rodrigues Mendes
dc.contributor.advisor1Latteshttp://lattes.cnpq.br/9005971441891787
dc.contributor.referee1Duarte, Gabriela Rodrigues Mendes
dc.contributor.referee1Latteshttp://lattes.cnpq.br/9005971441891787
dc.contributor.referee2Coltro, Wendell Karlos Tomazelli
dc.contributor.referee2Latteshttp://lattes.cnpq.br/8302650734477213
dc.contributor.referee3Luz, Leonardo Lopes da
dc.contributor.referee3Latteshttp://lattes.cnpq.br/7101131134427917
dc.creatorFerreira, Leonardo Matos
dc.creator.Latteshttp://lattes.cnpq.br/3584656629560609
dc.date.accessioned2025-08-08T18:23:08Z
dc.date.available2025-08-08T18:23:08Z
dc.date.issued2025-06-04
dc.description.abstractCOVID-19 and influenza are acute infections with overlapping symptoms such as cough, fever, sore throat, and myalgia, which can lead to misdiagnoses and hinder epidemiological control. This highlights the need for reliable and accessible testing methodologies to accurately identify these diseases and control the spread of their causative viruses. This study proposes a molecular detection strategy for the simultaneous discrimination of SARS-CoV-2 and Influenza A pathogens using RT-LAMP (Reverse Transcription Loop-Mediated Isothermal Amplification). The developed assay adopts a more selective approach with two sequential detection steps: a colorimetric stage, which confirms the presence of at least one of the viruses, and a lateral flow assay, which discriminates between them. In negative cases, the second step is omitted, saving resources and streamlining the diagnostic process. Reactions were initially optimized in a singleplex format and subsequently adjusted to duplex, performed at 65 °C for 40 minutes. Regarding the test specificity, no cross-reactivity with other respiratory viruses was observed, and the assay showed a detection limit of 150 copies of viral RNA/μL in both detection steps. When testing a panel of 60 clinical samples containing various SARS-CoV-2 variants and Influenza A subtypes, the assay showed an accuracy of 86.7% (colorimetric stage), 85.0% (lateral flow for SARS-CoV-2), and 88.3% (lateral flow for Influenza A) compared to the gold standard method RT-qPCR (Reverse Transcription followed by quantitative Polymerase Chain Reaction). The test can be completed in under one hour, is visually interpretable, and requires minimal laboratory infrastructure. The combination of molecular accuracy with operational simplicity makes it a promising tool for point-of-care applications, contributing to the control of COVID-19 and influenza, especially in resource-limited settings.eng
dc.description.resumoA COVID-19 e a gripe são infecções agudas com sintomas semelhantes como tosse, febre, dor de garganta e mialgia, o que pode gerar equívocos no diagnóstico clínico e no controle epidemiológico dessas doenças. Isso ressalta a importância de metodologias confiáveis e acessíveis para a testagem populacional com o intuito de identificá-las com acurácia e controlar a propagação dos vírus que as causam. Assim, este trabalho propõe a detecção molecular simultânea dos patógenos SARS-CoV-2 e vírus da Influenza A por RT-LAMP (Transcrição Reversa seguida de Amplificação Isotérmica Mediada por Loop). O teste desenvolvido adota uma abordagem seletiva com duas etapas de detecção sequenciais: uma colorimétrica, que confirma a presença de ao menos um dos vírus no meio, e outra por ensaio de fluxo lateral, que os diferencia. Nos casos em que o resultado é negativo, a segunda etapa é dispensada, o que economiza recursos e racionaliza o processo diagnóstico. As reações foram otimizadas, inicialmente, no formato singleplex e ajustadas em seguida para o formato duplex, ocorrendo a 65 °C por 40 minutos. Quanto a especificidade do teste, não foram observadas reações cruzadas com outros vírus respiratórios e o ensaio apresentou um limite de detecção de 150 cópias de RNA viral/μL nas duas etapas de detecção. Ao avaliar um painel com 60 amostras clínicas de diferentes variantes de SARS-CoV-2 e subtipos de Influenza A, o ensaio apresentou acurácia de 86,7% (na etapa colorimétrica), 85,0% (na etapa por fluxo lateral para SARS-CoV-2) e 88,3% (na etapa por fluxo lateral para Influenza A) em comparação ao método padrão-ouro RT-qPCR (Transcrição Reversa seguida da Reação em Cadeia da Polimerase quantitativa). O teste pode ser concluído em menos de uma hora, é visualmente interpretável e requer mínima infraestrutura laboratorial. A combinação da precisão molecular com a simplicidade operacional o torna promissor para aplicação no ponto de atendimento, auxiliando no controle da COVID-19 e da gripe, sobretudo, em locais com recursos limitados.
dc.description.sponsorshipCoordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES
dc.identifier.citationFERREIRA, L. M. Teste molecular com dupla estratégia de detecção para o diagnóstico diferencial de SARS-CoV-2 e Influenza A por RT-LAMP no ponto de atendimento. 2025. 89 f. Dissertação (Mestrado em Química) – Instituto de Química, Universidade Federal de Goiás, Goiânia, 2025.
dc.identifier.urihttps://repositorio.bc.ufg.br/tede/handle/tede/14590
dc.languagePortuguêspor
dc.publisherUniversidade Federal de Goiáspor
dc.publisher.countryBrasilpor
dc.publisher.departmentInstituto de Química - IQ (RMG)
dc.publisher.initialsUFGpor
dc.publisher.programPrograma de Pós-graduação em Química (IQ)
dc.rightsAcesso Aberto
dc.rights.urihttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
dc.subjectCOVID-19por
dc.subjectGripepor
dc.subjectAmplificação de ácidos nucleicospor
dc.subjectBioanálisepor
dc.subjectQuímica analíticapor
dc.subjectDiagnóstico molecularpor
dc.subjectInfluenzaeng
dc.subjectNucleic acid amplificationeng
dc.subjectBioanalysiseng
dc.subjectAnalytical chemistryeng
dc.subjectMolecular diagnosticeng
dc.subject.cnpqCIENCIAS EXATAS E DA TERRA::QUIMICA
dc.titleTeste molecular com dupla estratégia de detecção para o diagnóstico diferencial de SARS-CoV-2 e Influenza A por RT-LAMP no ponto de atendimento
dc.title.alternativeMolecular test with dual detection strategy for differential diagnosis of SARS-CoV-2 and Influenza A by RT-LAMP at the point of careeng
dc.typeDissertação

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