Produção e caracterização da atividade de tirosinase no extrato bruto de Pycnoporus sanguineus CCT-4518
dc.contributor.advisor-co1 | SANTIAGO, Mariângela Fontes | |
dc.contributor.advisor-co1Lattes | http://lattes.cnpq.br/7143224488081563 | por |
dc.contributor.advisor1 | BARA, Maria Teresa Freitas | |
dc.contributor.advisor1Lattes | http://lattes.cnpq.br/3914164125498267 | por |
dc.creator | DUARTE, Livia Teixeira | |
dc.creator.Lattes | http://lattes.cnpq.br/6430192923699467 | por |
dc.date.accessioned | 2014-07-29T16:11:53Z | |
dc.date.available | 2009-10-28 | |
dc.date.issued | 2009-07-15 | |
dc.description.abstract | Tyrosinase (E.C.1.14.18.1) is an enzyme of industrial interest that catalyses the ohydroxylation of monophenols (monophenolase activity) and the oxidation of o-diphenols to reactive o-quinones (diphenolase activity), both reactions using molecular oxygen. Pycnoporus sanguineus (L. ex Fries) Murril, is a white rot fungi capable of producing tyrosinase and widely distributed in nature. It is found in regions of mild climate and in tropical forest. The production and characterization of tyrosinase from P. sanguineus were investigated. The selection of inductors, determination of the luminosity influence, biomass and culture media in the production of tyrosinase and the effect of inhibitors on enzyme activity were determined. The fungus produced intracellular tyrosinase and the higher activity was observed using 0.15% L-tyrosine as inducer, in the presence of light, with inoculum of 10 mycelium discs, medium malt extract broth 2%, incubation at 30°C, and constant agitation of 150 rpm, during 2 days. 6 mmol.L-1 salicylhydroxamic acid (SHAM) and 6 mmol.L-1 phenylthiourea (PTU) inhibited 100% of the tyrosinase activity. 0.1 mmol.L-1 sodium azide inhibited 4.15% of tyrosinase activity, while no inhibition was observed after addition of 0.1 mmol.L-1 of phenylmethanesulfonyl fluoride (PMSF). Using L-dopa as substrate, the intracellular crude extract presented optimum pH of 6,6, optimum temperature of 45°C, low stability at 50°C, maintaining about 50% of the activity after 15 min of incubation. The tyrosinase production was confirmed by non-denaturing polyacrylamide gel electrophoresis, using commercial fungal tyrosinase as positive control | eng |
dc.description.provenance | Made available in DSpace on 2014-07-29T16:11:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTACAO DEFINITIVA c ficha catalografica.pdf: 2149699 bytes, checksum: ebcbff0f45d07e12d12a9708947a59eb (MD5) Previous issue date: 2009-07-15 | eng |
dc.description.resumo | A tirosinase (E.C.1.14.18.1), também conhecida como polifenoloxidase ou catecolase, é uma enzima de interesse industrial que catalisa a o-hidroxilação de monofenóis (atividade monofenolase) e a subseqüente oxidação do o-difenol resultante em o-quinonas reativas (atividade difenolase), usando oxigênio molecular. O Pycnoporus sanguineus (L. ex Fries) Murril, um fungo de decomposição branca (white rot) capaz de produzir a tirosinase, é amplamente distribuído na natureza, sendo encontrado em regiões de clima mais ameno e em florestas tropicais. A produção e caracterização da tirosinase produzida por P. sanguineus foi investigada. Foi realizada seleção de indutores, determinação da influência da luminosidade, biomassa e meios de cultura na produção de tirosinase, bem como o efeito de inibidores sobre a atividade enzimática. O extrato bruto enzimático foi caracterizado quanto ao pH ótimo, temperatura ótima e termoestabilidade. Os resultados obtidos demonstraram que o fungo produziu tirosinase intracelular e a mais alta atividade ocorreu com a utilização de 0,15% de L-tirosina como indutor, na presença de luz, com inóculo de 10 discos de micélio fúngico, meio caldo extrato de malte 2%, incubação à 30°C e agitação de 150 rpm, durante 2 dias. Ácido salicilhidroxâmico (SHAM) 6 mmol.L-1 e feniltiouréia (PTU) 6 mmol.L-1 inibiram 100% da atividade de tirosinase. Azida sódica 0,1 mmol.L-1 inibiu 4,15% da atividade de tirosinase, enquanto nenhuma inibição foi observada após adição de fluoreto de fenilmetanosulfonil (PMSF) 0,1 mmol.L-1. Utilizando a L-dopa como substrato, o extrato bruto intracelular apresentou pH ótimo de 6,6, temperatura ótima de 45°C, baixa estabilidade à temperatura de 50°C, mantendo apenas cerca de 50% de atividade após 15 minutos de incubação. A produção da tirosinase foi comprovada através de eletroforese em gel de poliacrilamida não desnaturante, tendo como controle positivo tirosinase fúngica comercial | por |
dc.format | application/pdf | por |
dc.identifier.citation | DUARTE, Livia Teixeira. Production and characterization of tyrosinase activity in Pycnoporus sanguineus CCT-4518 crude extract. 2009. 74 f. Dissertação (Mestrado em Ciências da Saúde - Farmácia) - Universidade Federal de Goiás, Goiânia, 2009. | por |
dc.identifier.uri | http://repositorio.bc.ufg.br/tede/handle/tde/2127 | |
dc.language | por | por |
dc.publisher | Universidade Federal de Goiás | por |
dc.publisher.country | BR | por |
dc.publisher.department | Ciências da Saúde - Farmácia | por |
dc.publisher.initials | UFG | por |
dc.publisher.program | Mestrado em Ciências Farmacêuticas | por |
dc.rights | Acesso Aberto | por |
dc.subject | Pycnoporus sanguineus, fungos de decomposição branca, tirosinase, MBTH, biotecnologia | por |
dc.subject | Pycnoporus sanguineus, white-rot fungi, tyrosinase, MBTH, biotechnology | eng |
dc.subject.cnpq | CNPQ::CIENCIAS DA SAUDE::FARMACIA | por |
dc.thumbnail.url | http://repositorio.bc.ufg.br/TEDE/retrieve/4889/DISSERTACAO%20DEFINITIVA%20c%20ficha%20catalografica.pdf.jpg | * |
dc.title | Produção e caracterização da atividade de tirosinase no extrato bruto de Pycnoporus sanguineus CCT-4518 | por |
dc.title.alternative | Production and characterization of tyrosinase activity in Pycnoporus sanguineus CCT-4518 crude extract | eng |
dc.type | Dissertação | por |
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