Clonagem e expressão heteróloga, modelagem e interações intermoleculares da enolpiruvilchiquimato 3-fosfato sintase de Paracoccidioides brasiliensis

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dc.contributor.advisor1Pereira, Maristela
dc.contributor.advisor1Latteshttp://lattes.cnpq.br/1345781867765758eng
dc.contributor.referee1Pereira, Maristela
dc.contributor.referee2Lacerda, Elisângela de Paula Silveira
dc.contributor.referee3Neves, Bruno Junior
dc.creatorCosta, Wanderson Lucas da
dc.creator.Latteshttp://lattes.cnpq.br/1779239304574744eng
dc.date.accessioned2017-09-15T13:46:23Z
dc.date.issued2017-08-07
dc.description.abstractParacoccidioides spp. are thermodymorphic fungi that when inhaled by humans, these conidia find a favorable environment, changing to the yeast phase and becoming pathogenic causing paracoccidioidomycosis (PCM), one of the most prevalent systemic mycoses in Brazil. Some antifungals are used in the treatment of PCM. Treatment depends on the patient's progression and tolerability of each drug, but their treatment may be for long periods and cause various side effects in the patient. The chiquimate pathway is coordinated by 7 enzymes that perform consecutive steps to convert erythrose-4-phosphate and phosphoenol pyruvate (PEP) into chorismate. In microorganisms, this pathway is involved in the production of the amino acids phenylalanine, tyrosine and tryptophan; These amino acids are essential to the maintenance of these organisms. In this work, pGEX4T3 vector cloning and heterologous expression of Pb18 EPSP synthase belonging to the chiquimate pathway were performed. This protein was expressed in E. coli (DE3) strain and purified. Antibodies were produced for expression analysis of the protein in Western blot. The modeling of EPSP synthase was performed aiming to identify the amino acids involved in the active site. The pull down-GST assay with soluble Pb18 proteins allowed the identification of 40 proteins that interact with EPSP synthase. These proteins belong to different functional categories, which are involved with the availability of phosphoenol pyruvate, the substrate necessary for the functioning of the chiquimate pathway.eng
dc.description.provenanceSubmitted by Cássia Santos (cassia.bcufg@gmail.com) on 2017-09-01T13:05:01Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Wanderson Lucas da Costa - 2017.pdf: 3043089 bytes, checksum: 32c1b9c81dae778ab37d939fdba41eb5 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5)eng
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dc.description.resumoParacoccidioides spp. são fungos termodimórficos que ao serem inalados pelo ser humano, esses conídios encontram um ambiente propício, mudando para a fase de levedura e tornando-se patogênico causando a paracoccidioidomicose (PCM), umas das micoses sistêmicas de maior prevalência no Brasil. Alguns antifúngicos são empregados no tratamento da PCM. O tratamento depende do avanço da doença e da capacidade de tolerância do paciente a cada medicamento, mas o seu tratamento pode ser por longos períodos e causando diversos efeitos colaterais no paciente. A via do chiquimato é coordenada pela ação de 7 enzimas que realizam passos consecutivos para transformar a eritrose-4-fosfato e fosfoenol piruvato (PEP) em corismato. Em micro-organismos, esta via está envolvida com a produção dos aminoácidos fenilalanina, tirosina e triptofano; estes aminoácidos são essenciais à manutenção desses organismos. Neste trabalho foi realizado a clonagem em vetor pGEX4T3 e expressão heteróloga da EPSP–sintase de Pb18 pertencente à via do chiquimato. Essa proteína foi expressa em linhagem E. coli (DE3) e purificada. Os anticorpos foram produzidos para análise da expressão da proteína em Western blot. A modelagem da EPSP-sintase foi realizada visando identificar os aminoácidos envolvidos no sítio ativo. O ensaio de pull down-GST com proteínas solúveis de Pb18 possibilitou a identificação de 40 proteínas que interagem com EPSP-sintase. Essas proteínas pertencem a diferentes categorias funcionais, as quais estão envolvidas com a disponibilidade de fosfoenol piruvato, substrato necessário para o funcionamento da via do chiquimato.eng
dc.description.sponsorshipCoordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPESeng
dc.formatapplication/pdf*
dc.identifier.citationCOSTA, W. L. Clonagem e expressão heteróloga, modelagem e interações intermoleculares da enolpiruvilchiquimato 3-fosfato sintase de Paracoccidioides brasiliensis. 2017. 85 f. Dissertação (Mestrado em Genética e Biologia Molecular) - Universidade Federal de Goiás, Goiânia, 2017.eng
dc.identifier.urihttp://repositorio.bc.ufg.br/tede/handle/tede/7714
dc.languageporeng
dc.publisherUniversidade Federal de Goiáseng
dc.publisher.countryBrasileng
dc.publisher.departmentInstituto de Ciências Biológicas - ICB (RG)eng
dc.publisher.initialsUFGeng
dc.publisher.programPrograma de Pós-graduação em Genética e Biologia Moleculareng
dc.rightsAcesso Aberto
dc.rights.urihttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
dc.subjectExpressão heterólogapor
dc.subjectEPSP-sintasepor
dc.subjectModelagempor
dc.subjectParacoccidioides brasiliensispor
dc.subjectPull down-GSTpor
dc.subjectVia do chiquimatopor
dc.subjectHeterologus expressioneng
dc.subjectEPSP-synthaseeng
dc.subjectModelingeng
dc.subjectParacoccidioides brasiliensiseng
dc.subjectPull down-GSTeng
dc.subjectShikimate pathwayeng
dc.subject.cnpqGENETICA::GENETICA MOLECULAR E DE MICROORGANISMOSeng
dc.titleClonagem e expressão heteróloga, modelagem e interações intermoleculares da enolpiruvilchiquimato 3-fosfato sintase de Paracoccidioides brasiliensiseng
dc.title.alternativeCloning and heterologous expression, modeling and intermolecular interactions of enolpiruvilchiquimato 3-phosphate synthase from Paracoccidioides brasiliensiseng
dc.typeDissertaçãoeng

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Mestrado em Genética e Biologia Molecular (ICB)