Identificação molecular de Metarhizium sp. em adultos de Aedes aegypti infectados

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dc.contributor.advisor1Rodrigues Filho, Juscelino
dc.contributor.referee1Luz, Wolf Christian
dc.contributor.referee1Rocha, Luiz Fernando Nunes
dc.contributor.referee1Rodrigues Filho, Juscelino
dc.creatorSilva, Fernanda Cristina Soares da
dc.date.accessioned2024-02-26T12:19:27Z
dc.date.available2024-02-26T12:19:27Z
dc.date.issued2023-07-28
dc.description.abstractThe use of entomopathogenic fungi has been an alternative of biorational control to control Aedes aegypti. A device containing mycoinsecticide based on Metarhizium humberi IP 46 for the focal control of A. aegypti adults is in developing. The evaluation of the effectiveness of this device under field conditions can be done with the aid of sensitive methods for detecting IP 46 in diseased mosquitoes captured in the field. To standardizing a methodology to detect IP 46 DNA present in A. aegypti adults after fungal exposure, adults were exposed to IP 46 formulations under laboratory or semi-field conditions for up to 8 or 14 days, respectively. In laboratory testing, the DNA extraction buffers by Saghai-Maroof et al. (1984) (I), Raeder and Broda (1985) (II) and Doyle and Doyle (1987) (III) were evaluated. For the semi-field test, the most efficient buffer in DNA extraction was used in the treated samples. The extractions and amplifications were confirmed by electrophoresis. The TEF-intron region was amplified by PCR using primers EF1T and EF2T. For positive control, use IP 46 mycelium, and for negative control, use unexposed mosquitoes. PCR products with positive amplification were sequenced. The results of the sequencing appreciated that, with buffer I, it was possible to extract DNA from IP 46 present in A. aegypti with incubation of 0, 6 or 8 days at 75% relative humidity (RH) and on 2 or 8 days more of 98% RH. With buffer II, fungal DNA transmission occurred in mosquitoes incubated for 4, 6 or 8 days at 75% RH and for 2, 4, 6 or 8 days at more than 98% RH. IP 46 DNA was obtained from mosquitoes incubated for 2, 6 or 8 days at 75% RH and 1, 2, 4 or 8 days at more than 98% RH, using buffer III. Buffer II showed the most consistent results, so it was used in field trials. With this methodology, it was possible to detect IP 46 in live or dead mosquitoes at different chances of fungal infection. The primers used in the PCR were specific for M. humberi, with no amplification of DNA from othermicroorganisms present in the tested mosquitoes. The buffer described by Raeder and Broda (1985) (II) was the most efficient in the transmission of M. humberi IP 46 DNA in A. aegypti adults, showing potential to be used in a technique for monitoring the effectiveness of the device under conditions field. The evaluation of the protocol in semi-field samples still needs to be done in a more standardized way.
dc.description.resumoA utilização de fungos entomopatogênicos tem sido uma alternativa de controle biorracional para controlar Aedes aegypti. Está em desenvolvimento um dispositivo contendo micoinseticida à base de Metarhizium humberi IP 46 para o controle focal de adultos de A. aegypti, e a avaliação da efetividade deste dispositivo em condições de campo pode ser feita com o auxílio de métodos sensíveis para detecção de IP 46 em mosquitos capturados no ambiente que foram expostos ao fungo. Para isso, o objetivo desta proposta foi padronizar uma metodologia para detectar DNA de IP 46 presente em adultos de A. aegypti após exposição fúngica. Adultos foram tratados com formulação de IP 46 em condições de laboratório ou semicampo por até 8 ou 14 dias, respectivamente. No teste de laboratório, foram avaliados os tampões de extração de DNA descritos por Saghai-Maroof et al. (1984) (I), Raeder e Broda (1985) (II) e Doyle e Doyle (1987) (III). Para o teste de semicampo, o tampão mais eficiente na extração de DNA foi utilizado nas amostras tratadas. As extrações e amplificações foram confirmadas por eletroforese. A região TEF-intron foi amplificada por PCR utilizando os primers EF1T e EF2T. Para controle positivo, utilizou-se micélio de IP 46, e para controle negativo, utilizou mosquitos não expostos. Os produtos de PCR com amplificação positiva foram sequenciados. Os resultados dos sequenciamentos mostraram que, com o tampão I, foi possível extrair DNA do IP 46 presente em A. aegypti com incubação de 0, 6 ou 8 dias a 75% de umidade relativa (UR) e nos dias 2 ou 8 a mais de 98% de UR. Com o tampão II, a extração de DNA do fungo ocorreu em mosquitos incubados por 4, 6 ou 8 dias a 75% de UR e por 2, 4, 6 ou 8 dias a mais de 98% de UR. O DNA de IP 46 foi obtido de mosquitos incubados por 2, 6 ou 8 dias a 75% de UR e 1, 2, 4 ou 8 dias a mais de 98% de UR, utilizando o tampão III. O tampão II apresentou os resultados mais consistentes, portanto, foi utilizado nos ensaios de semi campo. Com essa metodologia, foi possível detectar IP 46 em mosquitos vivos ou mortos em diferentes estágios de infecção fúngica. Os primers utilizados na PCR foram específicos para M. humberi, não havendo amplificação do DNA de outros microrganismos presentes na microbiota dos mosquitos testados. O tampão descrito por Raeder e Broda (1985) (II) foi o mais eficiente na extração de DNA de M. humberi IP 46 em adultos de A. aegypti, apresentando potencial para ser utilizado em uma técnica de monitoramento da eficácia do dispositivo em condições de campo. A avaliação do tampão em amostras de semicampo ainda precisa ser feita de forma mais padronizada.
dc.identifier.citationSILVA, Fernanda Cristina Soares da. Identificação molecular de Metarhizium sp. em adultos de Aedes aegypti infectados. 2023. 22 f. Trabalho de Conclusão de Curso (Bacharelado em Farmácia) - Faculdade de Farmácia, Universidade Federal de Goiás, Goiânia, 2023.
dc.identifier.urihttp://repositorio.bc.ufg.br//handle/ri/24412
dc.language.isopor
dc.publisherUniversidade Federal de Goiás
dc.publisher.countryBrasil
dc.publisher.courseFarmácia (RMG)
dc.publisher.departmentFaculdade de Farmácia - FF (RMG)
dc.publisher.initialsUFG
dc.rightsAcesso Aberto
dc.rights.urihttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
dc.subjectFungo entomopatogênico
dc.subjectMosquito
dc.subjectExtração
dc.subjectDNA
dc.subjectPCR
dc.subjectDetecção
dc.subjectEntomopathogenic fungus
dc.subjectMosquito
dc.subjectExtraction
dc.subjectDNA
dc.subjectPCR
dc.subjectDetection
dc.titleIdentificação molecular de Metarhizium sp. em adultos de Aedes aegypti infectados
dc.title.alternativeMolecular identification of Metarhizium sp. in infected Aedes aegypti adults
dc.typeTrabalho de conclusão de curso de graduação (TCCG)

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