Padronização do isolamento de vesículas extracelulares de Paracoccidioides brasiliensis e do modelo murino de Paracoccidioidomicose

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dc.contributor.advisor-co1Rocha, Olivia Basso
dc.contributor.advisor1Baltazar, Ludmila de Matos
dc.contributor.referee1Baltazar, Ludmila de Matos
dc.contributor.referee1Ribeiro, Evandro Leão
dc.contributor.referee1Santos, Gabriel de Almeida
dc.creatorMelo, Ana Paula Martins de
dc.date.accessioned2025-01-31T11:26:08Z
dc.date.available2025-01-31T11:26:08Z
dc.date.issued2024-11-29
dc.description.abstractParacoccidioidomycosis is an important systemic mycosis in Brazil, being the fungus of the genus Paracoccidioides spp. the etiological agents and Paracoccidioides brasiliensis species, the most prevalent in the country. The infection occurs through inhalation of infective propagules, which settle in the lungs and change the morphology to parasitic form. In addition to the action of the innate immune system, nutritional immunity is also considered a relevant reinforcement to control the disease by restricting the availability of several nutrients, including metals such as iron, which is important for the metabolic functions of the fungus. Consequently, the pathogen has developed strategies to circumvent the limitation of this metal, and extracellular vesicles are strategic structures that may be involved in the transference of virulence factors between fungal cells. Therefore, this study aims to standardize methods for isolating and characterizing extracellular vesicles produced by P. brasiliensis and to standardize a murine model of infection by the fungus. These approaches are to conduct future studies to understand how extracellular vesicles influence the pathogenicity of the disease. For this purpose, P. brasiliensis cells were cultured in solid modified minimal medium (MVM) under iron deprivation and sufficiency conditions for subsequent extraction of vesicles, which had their profile analyzed by Nanosight and the quantification of protein content was performed using the bicinchoninic acid method. For the assay with a murine model, 12 male Balb/c mice (CEUA 065/2022) were infected with 1x10⁶ P. brasiliensis 18 cells per animal, followed by euthanasia at 24, 48 and 72 hours after infection. For the murine model assay, 12 male Balb/c mice (CEUA 065/2022) were infected with 1x10⁶ P. brasiliensis 18 cells per animal, followed by euthanasia at 24, 48, and 72 hours after infection. At the determined times, bronchoalveolar lavage (BAL) was obtained to analyze the profile of recruited cells and the lungs were also removed, macerated in 1x phosphate-buffered saline (PBS), and cultured in supplemented brain-heart infusion (BHI) medium to assess the fungal load. The assay demonstrated that there was no statistically relevant difference in the characterization of the extracellular vesicles and in the quantification of their proteins. For the murine model, an increase in the total leukocyte count and an increase in the fungal load in the lung tissue were observed, even with the presence of inflammatory infiltrate. These results indicate that the standardization of the murine model would be an important advance for future studies on the pathogenicity of the disease and the use of extracellular vesicles as a mechanism of fungal virulence.
dc.description.resumoA Paracoccidioidomicose é uma relevante micose sistêmica do Brasil, sendo fungos do gênero Paracoccidioides spp. os agentes etiológicos e a espécie Paracoccidioides brasiliensis a mais prevalente do país. A infecção ocorre pela inalação dos propágulos infectantes, que se estabelecem nos pulmões e desenvolvem sua forma parasitária. Para controlar a doença, além da atuação do sistema imune inato, a imunidade nutricional também é considerada um reforço relevante ao restringir a disponibilidade de diversos nutrientes, incluindo os metais,como o ferro, que é importante para as funções metabólicas do fungo. Consequentemente, o patógeno desenvolve estratégias a fim de contornar a limitação deste metal, sendo as vesículas extracelulares potenciais estruturas responsáveis pela transferência de fatores de virulência entre células do fungo. Logo, esse estudo objetiva padronizar métodos para isolar e caracterizar vesículas extracelulares produzidas por P. brasiliensis, além de também padronizar o modelo murino de infecção pelo fungo. Essas abordagens visam conduzir estudos futuros para entender como as vesículas extracelulares influenciam a patogenicidade da doença. Para isso, as células de P. brasiliensis foram cultivadas em meio mínimo modificado (MVM) sólido, em condições de privação e de suficiência de ferro, para posterior extração das vesículas, que tiveram o perfil analisado por Nanosight e a quantificação do conteúdo proteico realizado pelo método do ácido bicinconínico. Para o ensaio com modelo murino, 12 camundongos da linhagem Balb/c machos (CEUA 065/2022) foram infectados com 1x10⁶ células de P. brasiliensis 18 por animal, seguido de eutanásia nos tempos de 24, 48 e 72 horas após a infecção. Nos tempos determinados, foi obtido o lavado broncoalveolar (LAV) para análise do perfil de células recrutadas e os pulmões foram também removidos, macerados em tampão fosfato salino 1x (PBS) e cultivados em meio infusão cérebro-coração (BHI) suplementado para avaliar a carga fúngica. O ensaio demonstrou que não houve diferença estatisticamente relevante na caracterização das vesículas extracelulares e na quantificação de suas proteínas. Para o modelo murino, foi observado o aumento na contagem de leucócitos totais e um aumento da carga fúngica no tecido pulmonar, mesmo com presença de infiltrado inflamatório. Estes resultados indicam que a padronização do modelo murino seria um avanço importante para estudos futuros acerca da patogenicidade da doença e a utilização das vesículas extracelulares como mecanismo de virulência do fungo.
dc.identifier.citationMELO, Ana Paula Martins de. Padronização do isolamento de vesículas extracelulares de Paracoccidioides brasiliensis e do modelo murino de Paracoccidioidomicose. 2024. 52 f. Trabalho de Conclusão de Curso (Bacharelado em Biomedicina) - Instituto de Ciências Biológicas, Universidade Federal de Goiás, Goiânia, 2024.
dc.identifier.urihttp://repositorio.bc.ufg.br//handle/ri/26491
dc.language.isopor
dc.publisherUniversidade Federal de Goiás
dc.publisher.countryBrasil
dc.publisher.courseBiomedicina (RMG)
dc.publisher.departmentInstituto de Ciências Biológicas - ICB (RMG)
dc.publisher.initialsUFG
dc.rightsAcesso Aberto
dc.rights.urihttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
dc.subjectParacoccidioides brasiliensis
dc.subjectPadronização
dc.subjectVesículas extracelulares
dc.subjectModelo murino
dc.subjectFerro
dc.subjectStandardization
dc.subjectExtracellular vesicles
dc.subjectMurine model
dc.subjectIron
dc.titlePadronização do isolamento de vesículas extracelulares de Paracoccidioides brasiliensis e do modelo murino de Paracoccidioidomicose
dc.title.alternativeStandardization of isolation of extracellular vesicles from Paracoccidioides brasiliensis and the murine model of Paracoccidioidomycosis
dc.typeTrabalho de conclusão de curso de graduação (TCCG)

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