Isolamento e caracterização molecular de campylobacter termotolerantes de origem avícola

dc.contributor.advisor-co1Lage, Moacir Evandro
dc.contributor.advisor-co1Latteshttp://lattes.cnpq.br/2053334263459111eng
dc.contributor.advisor-co2Rossi, Daise Aparecida
dc.contributor.advisor-co2Latteshttp://lattes.cnpq.br/7469197774289125eng
dc.contributor.advisor1Rezende, Cintia Silva Minafra e
dc.contributor.advisor1Latteshttp://lattes.cnpq.br/5841210447886226eng
dc.contributor.referee1Rezende, Cintia Silva Minafra e
dc.contributor.referee2Jardim Filho, Roberto de Morais
dc.contributor.referee3Georg, Raphaela de Castro
dc.contributor.referee4Sola, Marilia Cristina
dc.contributor.referee5Andrade, Maria Auxiliadora
dc.creatorFacuri, Janaina Costa Feistel
dc.creator.Latteshttp://lattes.cnpq.br/1028895613099922eng
dc.date.accessioned2019-01-09T13:11:14Z
dc.date.issued2018-03-07
dc.description.abstractCampylobacter thermotolerant species are frequently reported as one of the most important causes of human gastroenteritis, mainly caused by the consumption of contaminated poultry products. The knowledge of the pathogen prevalence in these products and the genetic correlation between the isolates are of extreme epidemiological importance. Therefore, it was proposed to evaluate the prevalence of thermoresistant species using a molecular method for the identification of Campylobacter jejuni, Campylobacter coli and Campylobacter lari and the use of molecular markers of genotyping in order to understand the genetic diversity of pathogenic species. For this, 300 carcases of refrigerated chickens collected in seven cold stores submitted to the Federal Inspection Service (SIF) were evaluated. The bacterial isolation technique was used first, and it was possible to determine the prevalence of Campylobacter in 34 carcases, totaling 11.3% of the total samples. It was verified that of the seven industries, two (A and C representing 28.5%) presented Campylobacter, of which only one (industry A) was verified the presence of the pathogen in more than one collection and in different seasons of the year. It was possible to obtain 48 Campylobacter isolates, which were submitted to real-time PCR analysis for genus confirmation and species determination. In addition, it was necessary to perform the conventional PCR analysis to determine the species in some isolates. After the molecular techniques were performed, 34 isolates (70.8%) belonged to the species Campylobacter jejuni; 08 isolates (16.6%) identified as Campylobacter coli and 06 isolates (12.5%) identified as Campylobacter lari. After identification of the species, the isolates were genotyped based on the analysis of restriction fragment polymorphisms of the flaA gene by the RFLP-flaA technique and were also evaluated by the small variable region sequencing technique of the flaA gene (SVR -FlaA). It was observed in this work that some isolates studied have high genomic similarity, which corroborates the hypothesis that the isolates of different companies have a source of contamination in common. In addition, the genetic similarity between thermotolerant species of the pathogen provides support for understanding the difficulty of determining the epidemiology of campylobacteriosis. The different genotypes and different restriction profiles found showed that in the same slaughterhouse there may be different sources of contamination of the carcasses. The number of isolates found here explains what is happening on the rest of the planet; the bacterium is present in poultry plants and should be monitored. In addition, the present study showed that SVR-flaA region sequencing and RFLP-flaA analysis were efficient and suitable methods for the subtyping of Campylobacter strains, it is worth mentioning that this is the first work involving the molecular subtyping of Campylobacter jejuni, Campylobacter coli and Campylobacter lari in the central-western region of Brazil.eng
dc.description.provenanceSubmitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2019-01-09T12:40:43Z No. of bitstreams: 2 Tese - Janaina Costa Feistel Facuri - 2018.pdf: 1400384 bytes, checksum: b6917abcdd8277fc4c72e3a2f36daab7 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5)eng
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dc.description.resumoAs espécies termotolerantes de Campylobacter são frequentemente relatadas como uma das mais importantes causas de gastroenterite humana, ocasionada principalmente pelo consumo de produtos avícolas contaminados. O conhecimento da prevalência do patógeno nesses produtos e a correlação genética entre os isolados são de extrema importância epidemiológica. Diante disso, foi proposto avaliar a prevalência das espécies termorresistentes, com a utilização de método molecular para identificação de Campylobacter jejuni, Campylobacter coli e Campylobacter lari e a utilização de marcadores moleculares de genotipagem no intuito de compreender a diversidade genética das espécies patogênicas. Para isso, foram avaliadas 300 carcaças de frangos refrigeradas coletadas em sete indústrias frigoríficas submetidas ao Serviço de Inspeção Federal (SIF). Utilizou-se primeiramente a técnica de isolamento bacteriano, sendo possível determinar a prevalência de Campylobacter em 34 carcaças, totalizando 11,3% do total de amostras avaliadas. Verificou-se que, das sete indústrias, duas (A e C representando 28,5%) apresentaram Campylobacter, destas, apenas uma (indústria A) foi verificada a presença do patógeno em mais de uma coleta e em diferentes estações do ano. Foi possível obter 48 isolados de Campylobacter os quais foram submetidos à análise de PCR em tempo real para confirmação do gênero e determinação da espécie, além disso, foi necessário realizar a análise de PCR convencional para determinação da espécie em alguns isolados. Após a realização das técnicas moleculares observou-se que 34 isolados (70,8%) pertenciam à espécie Campylobacter jejuni; 08 isolados (16,6%) identificados como Campylobacter coli e 06 isolados (12,5%) identificados como Campylobacter lari. Após a identificação das espécies, os isolados foram genotipados com base na análise dos polimorfismos dos fragmentos de restrição do gene flaA por meio da técnica de RFLP-flaA e em seguida também foram avaliados pela técnica de sequenciamento da pequena região variável do gene flaA (SVR-flaA). Observou-se neste trabalho que alguns isolados estudados apresentam alta similaridade genômica, o que corrobora a hipótese de que os isolados de diferentes empresas tenham uma fonte de contaminação em comum. Além disso, a similaridade genética entre as espécies termotolerantes do patógeno fornece suporte para o entendimento da dificuldade de se determinar a epidemiologia da campilobacteriose. Os diferentes genótipos e diferentes perfis de restrição encontrados demonstraram que no mesmo abatedouro podem existir diferentes fontes de contaminação das carcaças. A quantidade de isolados encontrados neste explicita o que ocorre no restante do planeta; a bactéria  está presente nos planteis avícolas e deve ser monitorada.  Adicionalmente, o presente estudo mostrou que o sequenciamento da região SVR-flaA e a análise do RFLP-flaA foram métodos eficientes e adequados para a subtipificação de estirpes de Campylobacter, vale ressaltar que este é o primeiro trabalho envolvendo a subtipificação molecular de Campylobacter jejuni, Campylobacter coli e Campylobacter lari na região centro-oeste do Brasil.eng
dc.description.sponsorshipFundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Goiás - FAPEGeng
dc.description.sponsorshipConselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPqeng
dc.formatapplication/pdf*
dc.identifier.citationFEISTEL, J. C. Isolamento e caracterização molecular de campylobacter termotolerantes de origem avícola. 2018. 88 f. Tese (Doutorado em Ciência Animal) - Universidade Federal de Goiás, Goiânia, 2018.eng
dc.identifier.urihttp://repositorio.bc.ufg.br/tede/handle/tede/9213
dc.languageporeng
dc.publisherUniversidade Federal de Goiáseng
dc.publisher.countryBrasileng
dc.publisher.departmentEscola de Veterinária e Zootecnia - EVZ (RG)eng
dc.publisher.initialsUFGeng
dc.publisher.programPrograma de Pós-graduação em Ciência Animal (EVZ)eng
dc.rightsAcesso Aberto
dc.rights.urihttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
dc.subjectBacteriologiapor
dc.subjectDiversidade genéticapor
dc.subjectPCRpor
dc.subjectEm tempo realpor
dc.subjectRFLP-flaApor
dc.subjectSVR-flaApor
dc.subjectBacteriologyeng
dc.subjectGenetic diversityeng
dc.subjectReal-time PCReng
dc.subjectRFLP-flaAeng
dc.subjectSVR-flaAeng
dc.subject.cnpqTECNOLOGIA DE ALIMENTOS::TECNOLOGIA DE PRODUTOS DE ORIGEM ANIMALeng
dc.titleIsolamento e caracterização molecular de campylobacter termotolerantes de origem avícolaeng
dc.title.alternativeIsolation and molecular characterization of campylobacter termotolerantes of poultry origineng
dc.typeTeseeng

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