Desenvolvimento de protótipos de testes imunocromatográficos para detecção de anticorpos específicos de leptospiras patogênicas em ratos e cães

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dc.contributor.advisor-co1McBride, Alan John Alexander
dc.contributor.advisor-co1Latteshttp://lattes.cnpq.br/2992146566426154eng
dc.contributor.advisor1Bührer, Samira
dc.contributor.advisor1Latteshttp://lattes.cnpq.br/6715236625981869eng
dc.contributor.referee1Bührer, Samira
dc.contributor.referee2Kpnis, André
dc.contributor.referee3Scaliante, Rodrigo
dc.contributor.referee4Souza, Guilherme Rocha Lino de
dc.contributor.referee5Pinto, Emerith Mayra Hungria
dc.creatorSouza, Dienny Rodrigues de
dc.creator.Latteshttp://lattes.cnpq.br/6662128434657259eng
dc.date.accessioned2018-08-16T11:24:33Z
dc.date.issued2018-07-02
dc.description.abstractLeptospirosis is a zoonosis caused by pathogenic spirochetes belonging to the genus Leptospira. The disease may progress to acute renal failure (Weil's Syndrome) and severe pulmonary haemorrhagic syndrome (SPHS), with a mortality rate of > 50%. The highest incidence of the disease occurs among the poorer populations and is associated with the lack of basic sanitation that gets worse during periods of heavy rainfall and flooding. Rodents and dogs are the main sources of transmission of the disease. Therefore, the identification of infected animals is essential towards eliminating reservoir hosts such as dogs and rodents. Therefore, means allowing the identification of leptospira infection in dogs and rodents is essential to permit control actions, decreasing the infection rate in the environment and consequently helping to prevent disease in humans. The objective of this study was to develop prototypes of lateral flow immunochromatographic tests to aid in the diagnosis and control of leptospirosis. The design used in the prototypes was based on a lateral flow immunochromatographic test for direct detection of specific antibodies using a recombinant antigen, known as rLigBrep, attached to the nitrocellulose membrane test line. As an antigen/antibody binding marker, polyvalent antibodies were conjugated to 40 nm colloidal gold, murine anti-mouse immunoglobulin for the murine, anti-canine (Rockland) and anti-canine IgG (Jackson) for canine prototypes. The canine prototypes were tested with 10 positive samples and 10 negative samples previously confirmed by the MAT and ELISA for canine leptospirosis. The staining intensity was recorded on a scale of 0 to 3. Low concentrations of rLigBrep antigen resulted in weak staining intensity. The results of the murine prototype provided the basic specifications to developed the canine prototypes. In the first canine prototype using Rockland conjugate, 5/10 positive samples presented staining intensity of 1. In the canine prototype using Jackson conjugate, 9/10 positive samples presented staining intensity variation of 1 to 3. The results of negative samples 8/10 presented a tenuous staining intensity on the test line, indicating the necessity to reduce the concentration of antigen and/or conjugate on the test. The studied prototypes were not evaluated to determine sensibility and specificity as they didn’t present similar results obtained on ELISA and MAT. Therefore, it has not been defined if the rLigBrep protein can be utilized in the development of a rapid immunochromatography test for the diagnosis of canine leptospirosis and as a marker of infection in rodents.eng
dc.description.provenanceSubmitted by Franciele Moreira (francielemoreyra@gmail.com) on 2018-08-14T13:28:54Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Dienny Rodrigues de Souza - 2018.pdf: 2932501 bytes, checksum: b9f00bbcfe53fb6001ad592bd08bbc63 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5)eng
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dc.description.resumoA leptospirose é uma zoonose causada por espiroquetas patogênicas do gênero Leptospira. A doença pode progredir para falência renal aguda (Síndrome de Weil) e síndrome hemorrágica pulmonar severa (SPHS), com taxa de mortalidade > 50%. A maior incidência da doença ocorre em populações mais carentes, ligada a deficiências em saneamento básico agravando-se em períodos de chuvas constantes e enchentes. Os roedores e os cães são os principais transmissores da doença. Portanto, meios que permitam a identificação de infecção por lepstospira em cães e roedores é essencial para permitir ações de controle, diminuindo a taxa de infecção no meio ambiente e consequentemente auxiliando na prevenção da doença nos humanos. O objetivo desse estudo foi desenvolver protótipos de testes imunocromatograficos de fluxo lateral para auxiliar no diagnóstico e controle da leptospirose. O desenho utilizado nos protótipos se baseiam em um teste imunocromatográfico de fluxo lateral para detecção direta de anticorpos específicos, utilizando antígeno recombinante rLigBrep fixado na linha teste da membrana de nitrocelulose. Como marcador da ligação antígeno/anticorpo foram utilizado nanoparticulas deouro coloidal de 40 nm conjugados a anti-imunoglobulina murina polivalente para o protótipo murino, anticorpo policlonal anti-IgG F(c) canino da Rockland e anticorpo policlonal anti-IgG F(c) canino da Jackson para os protótipos caninos. Os protótipos caninos foram testados com 10 amostras positivas e 10 amostras negativas confirmadas em MAT e ELISA para leptospirose canina. A intensidade de coloração dos resultados foi registrada em escala entre 0 a 3. As especificações dos materiais e concentrações do protótipo murino serviram de base para o desenvolvimento do protótipo canino. No protótipo canino utilizando conjugado Rockland, 5/10 amostras positivas apresentaram intensidade de coloração 1. Com o protótipo canino, utilizando conjugado Jackson, nas 9/10 amostras positivas a intensidade de coloração variou de 1 a 3. Entre resultados das amostras negativas 8/10 apresentaram uma coloração tênue na linha teste, indicando a necessidade de reduzir a concentração de antígeno e/ou conjugado no teste. Os protótipos estudados não foram avaliados para determinar a sensibilidade e especificidade pois ainda não apresentaram resultados semelhantes aos obtidos em ELISA e MAT. Portanto, não foi definido se proteína rLigBrep pode ser utilizada no desenvolvimento de um teste imunocromatográfico rápido para diagnóstico de leptospirose canina e como marcador de infecção por leptospiras em roedores.eng
dc.description.sponsorshipConselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPqeng
dc.formatapplication/pdf*
dc.identifier.citationSOUZA, D. R. Desenvolvimento de protótipos de testes imunocromatográficos para detecção de anticorpos específicos de leptospiras patogênicas em ratos e cães. 2018. 70 f. Dissertação (Mestrado em Medicina Tropical e Saúde Pública) - Universidade Federal de Goiás, Goiânia, 2018.eng
dc.identifier.urihttp://repositorio.bc.ufg.br/tede/handle/tede/8795
dc.languageporeng
dc.publisherUniversidade Federal de Goiáseng
dc.publisher.countryBrasileng
dc.publisher.departmentInstituto de Patologia Tropical e Saúde Pública - IPTSP (RG)eng
dc.publisher.initialsUFGeng
dc.publisher.programPrograma de Pós-graduação em Medicina Tropical e Saúde Publica (IPTSP)eng
dc.rightsAcesso Aberto
dc.rights.urihttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
dc.subjectLeptospirosepor
dc.subjectTestes rápidospor
dc.subjectImunocromatografiapor
dc.subjectRapid testseng
dc.subjectImmunochromatographyeng
dc.subject.cnpqCIENCIAS BIOLOGICAS::IMUNOLOGIAeng
dc.titleDesenvolvimento de protótipos de testes imunocromatográficos para detecção de anticorpos específicos de leptospiras patogênicas em ratos e cãeseng
dc.title.alternativeDevelopment of prototypes of immunochromatographic tests for the detection of antibodies specific for pathogenic leptospires in rats and dogseng
dc.typeDissertaçãoeng

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