Epidemiologia molecular de isolados de toxoplasma Gondii na região metropolitana de Goiânia, Goiás, Brasil

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dc.contributor.advisor-co1Vinaud, Marina Clare
dc.contributor.advisor-co1Latteshttp://lattes.cnpq.br/1921551651088660pt_BR
dc.contributor.advisor1Castro, Ana Maria de
dc.contributor.advisor1Latteshttp://lattes.cnpq.br/9232309971000621pt_BR
dc.contributor.referee1Castro, Ana Maria de
dc.contributor.referee2Fernandes, Everton Kort Kamp
dc.contributor.referee3Rocha, Thiago Lopes
dc.contributor.referee4Cardoso, Cléver Gomes
dc.contributor.referee5Soave, Danilo Figueiredo
dc.creatorRezende, Hanstter Hallison Alves
dc.creator.Latteshttp://lattes.cnpq.br/4982752673858886pt_BR
dc.date.accessioned2022-06-27T14:26:12Z
dc.date.available2022-06-27T14:26:12Z
dc.date.issued2018-01-12
dc.description.abstractThe protozoan Toxoplasma gondii is the etiological agent of toxoplasmosis and its definitive hosts are domestic cats (Felis catus) and other wild felids. Within the cities, stray cats are responsible for the dissemination of the parasite in the environment as they release oocysts which are the infective forms for humans and other animals. Backyard chickens (Gallus gallus) are in constant contact with the environment and feed directly from the soil. Therefore they are important indicators of environmental conditions. The knowledge regarding prevalence, biological and genetic characteristics of T. gondii are of utmost importance for the comprehension of the complex host-parasite relationship. Thus the aim of this study was to evaluate the concordance of laboratory techniques used to detect the parasite; to determine the prevalence, biology and molecular epidemiology of T. gondii isolated from stray cats and backyard chickens from the metropolitan region of Goiania, in order to better comprehend the infection. This is the first performed study to determine the genetic and biologic characterization of T. gondii in the state of Goias. This study used 24 stray cats captured by the Center for the Zoonosis Control in Goiania and 50 backyard chickens from the Metropolitan Region of Goiania, Goias. The serologic triage was performed by IHA and showed positivity of 87.4% (21/24) cats and 96% (48/50) backyard chickens for T. gondii. The bioassay was performed using the brain and hearts of the cats and chickens obtained after euthanasia of the animals. After the peptic digestion the homogenate tissues was intraperitoneally inoculated in groups of three Swiss mice each which were daily observed in order to detect signs of acute toxoplasmosis. The asymptomatic mice were euthanized after 60 days followed by serologic analysis through indirect immunofluorescence. Fragments of brain from these animals were observed under optic microscopy in order to visualize tissue cysts. Part of the homogenate was submitted to DNA extraction and polymerase chain reaction (PCR) in which 75% (18/24) cats and 64% (32/50) backyard chickens were positive. The correlation between IHA and PCR from both animals was considered weak. It was not possible to obtain isolate strains from cats. From the chickens it was possible to obtain 15 isolates strains from which 8 presented tachyzoites (acute toxoplasmosis) and 7 presented brain tissues (chronic toxoplasmosis). After the DNA extraction from the isolates the RFLP-PCR was performed using the following primers SAG1, 5’-3’ SAG2, altSAG, SAG3, BTUB, GRA6, c22-8, c29-2, L358, PK1, Apico and CS3. It was possible to define the genotype from 9 isolates. According to ToxoDB seven isolates corresponded to genotype #65 and two isolates have not been described previously. The genetic analysis showed high diversity and variability. The virulence essays showed that the mortality rate in mice in seven isolates that presented tachyzoites, from the same genotype, detected high virulence in 4 isolates and intermediary virulence in 3. The morphometry analysis of the tachyzoites of these isolates showed statistical difference in at least one of the analyzed variables such as length or nuclei-apical complex distance. These phenotypic differences in isolates from the same genotype show the need to the continuity of the genetic characterization of the parasite using other primers which could be related to the isolated phenotype. The study demonstrated the importance of knowledge about the molecular epidemiology of T. gondii in the metropolitan region of Goiânia, which presents high rates of seroprevalence in hosts.eng
dc.description.provenanceSubmitted by Marlene Santos (marlene.bc.ufg@gmail.com) on 2022-06-15T17:36:07Z No. of bitstreams: 2 Tese - Hanstter Hallison Alves Rezende - 2018.pdf: 2425754 bytes, checksum: 083627fdfc3e5661c86a26e42a846c18 (MD5) license_rdf: 805 bytes, checksum: 4460e5956bc1d1639be9ae6146a50347 (MD5)en
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dc.description.resumoO protozoário Toxoplasma gondii é o agente etiológico da toxoplasmose, possui como hospedeiro definitivo os gatos (Felis catus) e outros felídeos. Nas cidades, os gatos errantes são os responsáveis pela disseminação do parasito no meio ambiente, por liberarem oocistos em suas fezes, que são uma das formas infectantes para o homem e outros animais. As galinhas caipiras (Gallus gallus) por estarem em contato com o ambiente e se alimentarem diretamente do solo, são importantes indicadores da contaminação do ambiente por T. gondii. O conhecimento da prevalência, características biológicas e genéticas de T. gondii, é necessário para compreensão da complexa relação parasito-hospedeiro. Dessa forma, o objetivo desse estudo foi avaliar a concordância das técnicas laboratoriais utilizadas, a prevalência, a biologia e a epidemiologia molecular de T. gondii isolados de gatos errantes e galinhas caipiras na região metropolitana de Goiânia, para melhor compreensão da infecção. Este é o primeiro estudo realizado de caracterização genética e biológica de T. gondii no estado de Goiás. Compuseram o estudo 24 gatos errantes capturados pelo Centro de Controle de Zoonoses em Goiânia e 50 galinhas caipiras da Região Metropolitana de Goiânia, Goiás. Foi realizada a técnica de hemaglutinação indireta (HAI), como triagem dos animais positivos, sendo 87,4 % dos gatos e 96 % das galinhas caipiras foram soropositivas para T. gondii. Para realização do bioensaio foram utilizados o cérebro e coração dos gatos e galinhas obtidos após a eutanásia dos animais. Após a digestão péptica o homogenado dos tecidos, foi inoculado via intraperitoneal em grupos de três camundongos da linhagem Swiss, estes, foram avaliados diariamente para observação de sinais de toxoplasmose aguda. Os camundongos assintomáticos foram eutanasiados em 60 dias, sendo realizada a sorologia por Imunofluorescência indireta para constatar soroconversão, e fragmentos do cérebro foram observados ao microscópio para visualização de cistos. Parte do homogenado foi submetido a extração de DNA e reação em cadeia da polimerase (PCR), em que 75 % dos gatos e 64 % das galinhas apresentaram a PCR positiva. Ao analisar a correlação entre a técnica de HAI com a PCR os resultados obtidos em ambos modelos animais a concordância foi fraca. Não foram obtidos isolados dos gatos, mas das galinhas foram obtidos um total de 15 isolados, oito apresentavam taquizoítos (toxoplasmose aguda) e sete cistos cerebrais (toxoplasmose crônica). Após a extração de DNA dos isolados, realizou-se a técnica de Análise de Restrição de Fragmentos Polimórficos (RFLP-PCR) utilizando os marcadores SAG1, 5’-3’ SAG2, altSAG, SAG3, BTUB, GRA6, c22-8, c29-2, L358, PK1, Apico e CS3. Foi possível definir o genótipo de nove isolados; sete correspondem ao genótipo #65 de acordo com o ToxoDB e dois isolados não descritos. A análise demonstrou alta diversidade genética e variabilidade genética. Além da análise genética, foram realizados testes de virulência na avaliação da mortalidade de camundongos em sete isolados que apresentaram taquizoítos; mesmo sendo do mesmo genótipo, quatro foram definidos como alta virulência e três com virulência intermediária. Ao se avaliar a morfometria dos isolados, todos apresentaram diferença em uma das variáveis avaliadas, seja no comprimento, largura ou distância do núcleo-complexo apical. As diferenças fenotípicas observadas nos isolados, mesmo sendo do mesmo genótipo, demonstra a necessidade na continuidade da caracterização genética do parasito, utilizando outros marcadores que poderiam se relacionar com o fenótipo do isolado. Estes dados demonstraram a importância de estudos de epidemiologia molecular na região metropolitana de Goiânia, que apresenta elevadas taxas de soroprevalência nos hospedeiros.pt_BR
dc.description.sponsorshipFundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Goiáspt_BR
dc.identifier.citationREZENDE, H. H. A. Epidemiologia molecular de isolados de toxoplasma Gondii na região metropolitana de Goiânia, Goiás, Brasil. 2018. 150 f. Tese (Doutorado em Medicina Tropical e Saúde Publica) - Universidade Federal de Goiás, Goiânia, 2018.pt_BR
dc.identifier.urihttp://repositorio.bc.ufg.br/tede/handle/tede/12127
dc.languageporpt_BR
dc.publisherUniversidade Federal de Goiáspt_BR
dc.publisher.countryBrasilpt_BR
dc.publisher.departmentInstituto de Patologia Tropical e Saúde Pública - IPTSP (RG)pt_BR
dc.publisher.initialsUFGpt_BR
dc.publisher.programPrograma de Pós-graduação em Medicina Tropical e Saúde Publica (IPTSP)pt_BR
dc.rightsAttribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 International*
dc.rights.urihttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/*
dc.subjectToxoplasmosepor
dc.subjectGalinhas caipiraspor
dc.subjectGatos errantespor
dc.subjectGenotipagempor
dc.subjectDiversidade genéticapor
dc.subjectToxoplasmosiseng
dc.subjectBackyard chickenseng
dc.subjectStray catseng
dc.subjectBioassayeng
dc.subjectGenetic diversityeng
dc.subject.cnpqCIENCIAS BIOLOGICAS::GENETICA::GENETICA ANIMALpt_BR
dc.titleEpidemiologia molecular de isolados de toxoplasma Gondii na região metropolitana de Goiânia, Goiás, Brasilpt_BR
dc.title.alternativeMolecular epidemiology of isolates of toxoplasma Gondii in the metropolitan region of Goiânia, Goiás, Brazileng
dc.typeTesept_BR

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