Identificação proteômica, seqüência de nucleotídeos, expressão heteróloga e reatividade imunológica da triose fosfato isomerase de Paracoccidioides brasiliensis

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dc.contributor.advisor1Soares, Célia Maria de Almeida
dc.contributor.advisor1Latteshttp://lattes.cnpq.br/8539946335852637por
dc.contributor.referee1Soares, Célia Maria de Almeida
dc.contributor.referee2Pereira, Maristela
dc.contributor.referee3Hahn, Rosane Cristine
dc.creatorPereira, Luiz Augusto
dc.creator.Latteshttp://lattes.cnpq.br/1549739934623931por
dc.date.accessioned2014-12-15T17:01:19Z
dc.date.issued2004-05-03
dc.description.abstractAn antigen of Paracoccidioides brasiliensis (Pb) was gel isolated and characterized. Endoproteinase Lys-C digested peptides of the purified protein which presented, molecular mass of 29-kDa and pI of 5.8, were subjected to sequence analysis of its amino acids. Search at databases comparing the sequence of amino acids from the three peptides of the native protein, revealed strong homology to triosephosphate isomerase (TPI: E.C. 5.3.1.1) from several sources. The complete cDNA and gene encoding PbTPI were obtained and both contained an open reading frame predicted to encode a 249 amino acid protein that presented all the peptides characterized in the native PbTPI. The Pbtpi gene contained 6 exons interrupted by 5 introns. Analysis performed with the deduced PbTPI suggested its usefulness in providing phylogenetic relatedness, as well as evidenced the correlation between the phylogeny provided by the deduced proteins and introns positions in the cognate genes. The immunological reactivity of PbTPI was examined. The complete coding cDNA of PbTPI was over expressed in an Escherichia coli host to produce high levels of recombinant fusion protein with glutathione S-transferase (GST) that has been purified by affinity chromatography. The purified recombinant TPI was recognized by sera of patients with confirmed Paracoccidioidomycosis and not by sera of healthy individuals. Thus, recombinant PbTPI can be a valuable addition to the still small arsenal of P. brasiliensis immunoreactive proteins, which could be tested for incorporation in assays for serodiagnosis of the disease.eng
dc.description.resumoUm antígeno de Paracoccidioides brasiliensis (Pb) foi isolado do gel e caracterizado. Os peptídeos digeridos por Endoproteinase Lys-C da proteína purificada, que apresentou uma massa molecular de 29-kDA e pI de 5.8, foram submetidos à análise da seqüência de aminoácidos. Uma busca em bancos de dados de seqüências de aminoácidos comparados com os três peptídeos da proteína nativa revelou forte homologia com triose fosfato isomerase (TPI: E.C. 5.3.1.1) de vários organismos. O cDNA e o gene completos que codificam para PbTPI foram obtidos, e ambos contém uma provável ORF que codifica para uma proteína com 249 aminoácidos que apresenta todos os peptídeos caracterizados na PbTPI nativa. O gene Pbtpi apresentou 6 exons interrompidos por 5 introns. Análises realizadas com a PbTPI deduzida sugerem sua utilidade em prover relações filogenéticas, como também evidenciou a correlação entre a filogenia gerada pelas proteínas deduzidas e as posições dos introns nos genes cognatos. A reatividade imunológica da PbTPI foi examinada. O cDNA completo que codifica para PbTPI foi altamente expresso no hospedeiro Escherichia coli, produzindo altos níveis de uma proteína recombinante fundida a glutathione S-transferase (GST), que foi purificada por cromatografia de afinidade. A TPI recombinante purificada foi reconhecida por soros de pacientes com paracoccidioidomicose confirmada e não por soros de indivíduos saudáveis. Assim, PbTPI recombinante pode ser uma adição valiosa para o pequeno arsenal de proteínas imunoreativas de P. brasiliensis, que poderiam ser testadas por incorporação em ensaios de sorodiagnóstico da doença.por
dc.description.sponsorshipCoordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPESpor
dc.formatapplication/pdf*
dc.identifier.citationPEREIRA, Luiz Augusto. Identificação proteômica, seqüência de nucleotídeos, expressão heteróloga e reatividade imunológica da triose fosfato isomerase de Paracoccidioides brasiliensis. 2004. 65 f. Dissertação (Mestrado em Medicina Tropical e Saúde Publica) - Universidade Federal de Goiás, Goiânia, 2004.por
dc.identifier.urihttp://repositorio.bc.ufg.br/tede/handle/tede/3778
dc.languageporpor
dc.publisherUniversidade Federal de Goiáspor
dc.publisher.countryBrasilpor
dc.publisher.departmentInstituto de Patologia Tropical e Saúde Pública - IPTSP (RG)por
dc.publisher.initialsUFGpor
dc.publisher.programPrograma de Pós-graduação em Medicina Tropical e Saúde Publica (IPTSP)por
dc.rightsAcesso Abertopor
dc.rights.urihttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
dc.subjectParacoccidioides brasiliensispor
dc.subjectTriose fosfato isomerasepor
dc.subjectClonagem do gene e análise estruturalpor
dc.subjectProteína recombinantepor
dc.subjectReatividade imunológicapor
dc.subjectGene cloning and structural analysiseng
dc.subjectRecombinant proteineng
dc.subjectImmunological reactivityeng
dc.subject.cnpqCIENCIAS BIOLOGICAS::MICROBIOLOGIApor
dc.thumbnail.urlhttp://repositorio.bc.ufg.br/tede/retrieve/13809/Disserta%c3%a7%c3%a3o%20-%20Luiz%20Augusto%20Pereira%20-%202004.pdf.jpg*
dc.titleIdentificação proteômica, seqüência de nucleotídeos, expressão heteróloga e reatividade imunológica da triose fosfato isomerase de Paracoccidioides brasiliensispor
dc.title.alternativeProteomic identification, nucleotide sequence, heterologous expression and immunological reactivity of the triosephosphate isomerase of Paracoccidioides brasiliensiseng
dc.typeDissertaçãopor

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Mestrado em Medicina Tropical e Saúde Pública (IPTSP)